24小时热门版块排行榜    

查看: 7816  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

SDAUWY

新虫 (初入文坛)

[求助] 分子新手,PCR产物回收浓度太低,请教各位虫友! 已有6人参与

本人刚开始接触分子方面的试验,准备做RNA干扰,目前正用带T7的引物跑PCR,产物带挺亮,然后用天根的试剂盒切胶回收的浓度太低,一般都在30ng/μl左右。我后续要用这个回收产物做模板走promega T7BiboMAX Express RNAi System 这个试剂盒的程序,要求模板量在1 μg,但我的回收产物远不够这个量,请教各位虫友怎么提高回收产物的量,或者有做过这个的我想请教下整个过程,非常感谢!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物知识 蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SDAUWY

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 博克侬浮码 at 2015-06-18 10:36:19
多扩几管PCR,在回收过柱子的时候把离心后的液体再过一遍柱子,洗脱时也是,洗脱两次,加的洗脱液量不要太大,我这样做回收的时候浓度在100-300ng/ul左右

谢谢,我再试试,今天刚跑的PCR产物有500-600的浓度,按你的说法做做试试看能回收到多少
4楼2015-06-18 15:54:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

博克侬浮码

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
SDAUWY(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:41:09
多扩几管PCR,在回收过柱子的时候把离心后的液体再过一遍柱子,洗脱时也是,洗脱两次,加的洗脱液量不要太大,我这样做回收的时候浓度在100-300ng/ul左右
2楼2015-06-18 10:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doudou_32

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
SDAUWY(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:41:17
如果你跑出来的带是单一一条带,可以试试PCR产物回收试剂盒,回收效率会高一些。
3楼2015-06-18 11:03:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
摇菌时间稍微增加;菌量加大回收;洗脱液少放点就好了
努力打败一切
5楼2015-06-19 10:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:46 by haxia
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +10 曦熙兮 2026-03-15 10/500 2026-03-18 14:19 by 007_lilei
[考研] 【0856】化学工程(085602)313 分,本科学科评估A类院校化学工程与工艺,诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 8/400 2026-03-17 16:57 by ruiyingmiao
[考研] 085600材料与化工 +4 安全上岸! 2026-03-16 4/200 2026-03-17 14:02 by 勇敢太监王公公
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] [0860]321分求调剂,ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 土木第一志愿276求调剂,科研和技能十分丰富,求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见