24小时热门版块排行榜    

查看: 8224  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

SDAUWY

新虫 (初入文坛)

[求助] 分子新手,PCR产物回收浓度太低,请教各位虫友! 已有6人参与

本人刚开始接触分子方面的试验,准备做RNA干扰,目前正用带T7的引物跑PCR,产物带挺亮,然后用天根的试剂盒切胶回收的浓度太低,一般都在30ng/μl左右。我后续要用这个回收产物做模板走promega T7BiboMAX Express RNAi System 这个试剂盒的程序,要求模板量在1 μg,但我的回收产物远不够这个量,请教各位虫友怎么提高回收产物的量,或者有做过这个的我想请教下整个过程,非常感谢!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物知识 蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SDAUWY

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 博克侬浮码 at 2015-06-18 10:36:19
多扩几管PCR,在回收过柱子的时候把离心后的液体再过一遍柱子,洗脱时也是,洗脱两次,加的洗脱液量不要太大,我这样做回收的时候浓度在100-300ng/ul左右

谢谢,我再试试,今天刚跑的PCR产物有500-600的浓度,按你的说法做做试试看能回收到多少
4楼2015-06-18 15:54:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

博克侬浮码

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
SDAUWY(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:41:09
多扩几管PCR,在回收过柱子的时候把离心后的液体再过一遍柱子,洗脱时也是,洗脱两次,加的洗脱液量不要太大,我这样做回收的时候浓度在100-300ng/ul左右
2楼2015-06-18 10:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doudou_32

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
SDAUWY(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-19 20:41:17
如果你跑出来的带是单一一条带,可以试试PCR产物回收试剂盒,回收效率会高一些。
3楼2015-06-18 11:03:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjingjing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
摇菌时间稍微增加;菌量加大回收;洗脱液少放点就好了
努力打败一切
5楼2015-06-19 10:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +16 基诺咪客 2026-08-17 20/1000 2026-08-20 12:44 by 201120518022
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +16 Ldrop2023 2026-08-13 20/1000 2026-08-20 11:07 by xskun
[基金申请] 言之凿凿,8月21号(明天)放榜 +12 医学老男孩 2026-08-20 14/700 2026-08-20 10:53 by ran2233
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 21/1050 2026-08-20 10:37 by Vivilian
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见