| 查看: 932 | 回复: 2 | ||
[求助]
DNA质粒的连接 已有1人参与
|
|
DNA质粒连接是要注意什么问题啊？跪求各位大神告知 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有141人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于目的基因与载体连接后转化感受态细胞提取质粒的问题。
已经有8人回复
- 双酶切的目的基因与质粒连接不上怎么办
已经有25人回复
- 质粒DNA转染遇到的一些问题
已经有9人回复
- 重组质粒构建 连接转化效率低 求帮助啊
已经有19人回复
- 以质粒DNA为模板的PCR问题
已经有5人回复
- PET28a重组质粒酶切后有三条？
已经有10人回复
- 如何获取目的质粒？
已经有8人回复
- 求去掉环状质粒中酶切位点和切后的质粒连接问题？
已经有7人回复
- 如何定位质粒整合到基因组的位点
已经有3人回复
- DNA片段连接到载体上都有什么方法
已经有6人回复
- 质粒与片段的连接
已经有9人回复
- 基因与载体连接转化后涂版长出了菌，提质粒却没有提出来，不知道什么原因？？
已经有17人回复
- 目的基因连接到克隆载体后提取质粒测序，序列有问题
已经有11人回复
- 构建质粒时 质粒上的ATG与目的基因ATG 的问题
已经有4人回复
- pAN7-1质粒分析
已经有18人回复
- 新提的质粒DNA，关于浓度和纯度虫友们发表一些看法吧
已经有32人回复
- DNA的连接反应
已经有5人回复
- 质粒DNA保质期
已经有9人回复
- 【求助/交流】质粒跟目的基因连接不上怎么办
已经有17人回复
- 【求助/交流】请问大家：将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊？
已经有7人回复
- 【求助/交流】如何确定一段基因的位置在染色体还是在质粒上？
已经有11人回复
xiatianli888
金虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1675.1
- 帖子: 46
- 在线: 67.6小时
- 虫号: 1270667
- 注册: 2011-04-19
- 性别: MM
- 专业: 动脉粥样硬化与动脉硬化
2楼2015-06-12 07:26:53
恶魔的左眼
木虫 (正式写手)
- 应助: 110 (高中生)
- 金币: 2237.7
- 红花: 20
- 帖子: 425
- 在线: 880.6小时
- 虫号: 3705608
- 注册: 2015-03-03
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
这个东西网上一搜一大把。。。 1、连接反应的温度：DNA连接酶的最适反应温度为３７℃，但在此温度下， 粘性末端的氢键结合很不稳定，折衷方法是１２℃过夜。 2、DNA的平未端和粘性末端：由于内切酶产生的DNA末端有平未端和粘性末端，因而连接反应中就有平未端连接和粘性末端连接。 二者连接效率不同。粘性末端效率高，因而在底物浓度，酶浓度选择上是有差异的。 3、 碱性磷酸酶处理质粒载体：为了提高连接效率，一般采取提高DNA的浓度，增加重组子比例。这样就会出现DNA自生连接问题， 为此通常选择对质粒载体用碱性磷酸酶处理，除去其５’末端的磷酸基，防止环化， 通过接反应后形成的缺口可在转化细胞后得以修复。 4、连接反应的检测：连接反应成功与否，最后的检测要通过下一步实验，转化宿主菌， 阳性克隆的筛选来确定。 5、如果要检验连接酶和连接酶专用的缓冲液是否有效，可重新连接酶切后的λDNA。若连接成功，则说明有效。 |
3楼2015-06-12 10:15:07
