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546516632

铜虫 (小有名气)

[求助] 普通PCR只有二聚体是什么原因已有2人参与

用枯草的基因组做模板,用的Taq 酶,pcr条件换了几次都是那样。
退火温度用过50、52、55、58、60、65。25μl体系,引物是10mM加0.5、0.6、1。

1002bp        mdh上游引物        GCGGATCCATGAAAGCACTCGTATT        25        BamHⅠ
        mdh下游引物        GCTCTAGACTAGTCACCTACTTTAAC        26        XbaⅠ
786bp        xylA上游引物        GCTCTAGAATGGCTCAATCTCATTCC        26        XbaⅠ
        xylA下游引物        GCCCCGGGTTATACTTCTAAAATGTA        26        XmaⅠ/SmaⅠ
1338bp        gdh上游引物        GCCCCGGGATGTATCCGGATTTAAAAG        27        XmaⅠ/SmaⅠ
        gdh下游引物        TTAAGCTTTTAACCGCGGCCTGCCT        25        HindⅢ
1440bp        sucA上游引物        TTGAATTCATGACAGCACATGACCAG        26        EcoRⅠ
        sucA下游引物        GCGGTACCCTACATAAGTGTCCAAAT        26        KpnⅠ
214bp        mtld1上游引物        ATGGTCAGCCTCCTCAAT        18       
        mtld1下游引物        GTCTTAAACCTTCTGCGATA        20       
257bp        g6pdh1上游引物        AACGGACAAATCGGAGAA        18       
        g6pdh1下游引物        GCCATTGCCAAGTAGAAC        18

普通PCR只有二聚体是什么原因
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浮生半辈子

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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546516632: 金币+1, 有帮助 2015-06-12 09:48:56
546516632: 金币+2, 有帮助 2015-06-14 14:51:23
一,凝胶电泳的引物二聚体很严重,说明引物的设计有问题。可以尝试更换引物重新做PCR。
二,部分样孔,图像颜色很浅,可能是降解的原因。
3楼2015-06-09 14:15:38
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
不知是否检查过模板是不是降解,或者模板的浓度大概多少,再就是酶建议换好点的高保真的酶来扩增
2楼2015-06-09 13:25:21
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