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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 细胞密度降一半，蛋白表达量不变-重组CHO细胞表达蛋白
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caizijin

木虫 (小有名气)

[交流] 细胞密度降一半，蛋白表达量不变-重组CHO细胞表达蛋白

本人做重组CHO细胞表达蛋白,在3L和30L发酵罐上做发酵,采用国产基础培养基培养,流加培养基是同一公司生产的,3L罐采用液体流加培养基F1,流加培养基中添加300g/L 的葡萄糖，体积比F1：葡萄糖=2：1，终糖浓度117g/L，30L罐采用同样配方的干粉流加培养基配制,配制过程按厂家说明书，配制过程直接添加固体葡萄糖一起溶解，终糖浓度133.3g/L，流加过程控制糖浓度，按糖消耗量预测次日糖消耗量，根据流加培养基糖浓度计算流加体积。最终发酵结果显示，3L罐的最高细胞密度可达到1.5*10的7次方，而30L罐的最高细胞密度仅为3L罐的一半，但ELISA检测蛋白含量差不多，无法解释这个现象，是否有高手帮忙解答一下。
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小木虫一枚
1楼2015-06-04 14:29:52
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白木清水

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这就涉及到细胞罐的放大～就这点信息。。你的细胞密度跟你3L第几天有差距的？

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2楼2015-06-04 18:39:53
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hzmmzh
3楼2015-06-04 19:11:28
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renbingling

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
说句实话，楼主的培养基的渗透压估计已经严重爆表了吧！
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细胞大规模培养工艺
4楼2015-06-08 08:39:44
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hydzp

木虫之王 (文学泰斗)
zzzzzzzfffffffffffffff
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5楼2015-06-08 08:54:45
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纳米之心

木虫 (文坛精英)
祝福楼主
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火星人要回火星了！！！
6楼2015-06-08 09:01:37
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这种情况说不清啊，CHO细胞转染适合构建稳定细胞系从而生产大量蛋白，培养30L也太浪费质粒培养基啥的了吧，而且没有菌污染么，换个293瞬转试试，还有培养3L的你得到了多少蛋白？用了多少质粒啊  30L 呢
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-10-20 15:45:16
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Jaky_chen

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
VCD下降一半而最终的表达量基本不便的情况，一般不会出现，所以要看你的表达量在什么水平上，如果是表达量很低的话就没什么好奇怪的了（看到你是用ELISA检测的，表达量估计不高）。不过你的pVCD能到17*E6/mL，按目前行业内的水平算，表达量至少要到2 g/L以上，如果不到的话，可能是一些特殊原因造成的吧？

还是要具体问题具体分析的，不过现在F12很少有人用在CHO了吧。
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8楼2015-10-29 13:18:31
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