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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何判断转染的细胞表达了自己想要的蛋白
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菜菜的夏子

铜虫 (小有名气)

[交流] 如何判断转染的细胞表达了自己想要的蛋白 已有2人参与

老板让我求得pEGFP-N1质粒一枚，转染细胞成功，筛到了稳定株。
    还未高兴完，老板让我把EGFP基因酶切掉，连进去自己的基因，以用于后续实验。希望可以单独表达这个基因所对应的蛋白，不要绿色荧光蛋白。
    我不太明白，既然不要绿色荧光蛋白，干吗还让筛绿色荧光蛋白的稳定株？问原因，老板说让做对照。但是我还是搞不太明白呀，这样的对照也没意义呀？反正自己的样品中绿色荧光蛋白蛋白已经切掉了……这样的对照也没啥意义呀？大家说呢？
    这个先按下不表。
    现在老板说想单独表达自己的蛋白，不希望跟绿色荧光蛋白融合表达。但是不知道怎么才能确定自己转染的细胞稳定表达了自己想要的蛋白呢？老板让我去查，我不知道该从哪里下手啊！所以恳求各位大侠指点。
    还有一点，表达融合蛋白怎么了？不好吗？
    肯定各位指点了。谢谢谢谢……不胜感激……
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1楼 2011-06-17 15:33:36
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 言简意赅。Wester Blot和Real-time PCR都可以，不过WB更确切。 2011-06-18 10:10:47
做WB检测。。。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-06-17 18:55:34
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xbl3688

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-08-22 17:58:52
之前的质粒连有荧光蛋白基因是为了方便筛选，帮助获得稳定株。之后切掉荧光蛋白基因再连自己的目的基因是想利用这个质粒的优点表达目的基因，因为连了荧光蛋白的质粒是别人研究过的，所以变一变，只连自己的基因表达是不是更有创新性呢？
    至于这个对照嘛，我感觉是要拿 1.荧光蛋白基因跟目的基因融合表达 跟 2.只连目的基因表达 作对照，从中分析融合表达前后的差距，不懂你老板是什么个意思
    个人看法
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
3楼2011-08-22 13:26:18
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菜菜的夏子

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xbl3688 at 2011-08-22 13:26:18:
之前的质粒连有荧光蛋白基因是为了方便筛选，帮助获得稳定株。之后切掉荧光蛋白基因再连自己的目的基因是想利用这个质粒的优点表达目的基因，因为连了荧光蛋白的质粒是别人研究过的，所以变一变，只连自己的基因表 ...

嗯，有可能是这种想法，谢谢你的提醒。我明白了。呵呵。
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4楼2011-08-23 12:01:27
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