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sanmaoecho

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细胞系转染的时间探讨

想了解一下大家做细胞转染时的几个小细节：1、对于293、293T这种贴壁不是很紧的细胞系，大家都是分了细胞之后多长时间做转染呢？或者细胞长到那种密度做转染呢？2、转染之后大家都是多久收细胞呢？或者是多大密度收细胞呢？3、转染之后的细胞如果很长时间不收，例如48h~72h不收细胞，转进去的外源基因还有没有表达呢？表达量怎么样呢？希望和有经验的大侠探讨一下啊
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1楼 2011-01-21 14:19:14
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feng__

金虫 (著名写手)
sanmaoecho(金币+1): 2011-01-21 17:31:01
1,  铺板24-48转染   主要看你铺的密度  想24H的话可以1W每孔

2，脂质体转染24H够了，不过我们做的时候不收细胞，直接做flipr

3, 48H还没神马问题的，72就不知道了
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2楼2011-01-21 16:05:35
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sanmaoecho

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by feng__ at 2011-01-21 16:05:35:
1,  铺板24-48转染   主要看你铺的密度  想24H的话可以1W每孔

2，脂质体转染24H够了，不过我们做的时候不收细胞，直接做flipr

3, 48H还没神马问题的，72就不知道了

谢谢！如果我想在铺板之后16h或者更短的时间内做转然可以吗？用的是维格拉斯的VigoFect脂质体
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3楼2011-01-21 17:33:44
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feng__

金虫 (著名写手)
sanmaoecho(金币+1): 谢谢！ 2011-01-22 09:00:17
引用回帖:
Originally posted by sanmaoecho at 2011-01-21 17:33:44:

谢谢！如果我想在铺板之后16h或者更短的时间内做转然可以吗？用的是维格拉斯的VigoFect脂质体

细胞铺的密一点就行了
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4楼2011-01-22 00:12:16
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zhp1984816

铜虫 (初入文坛)
★ ★
sanmaoecho(金币+1): 谢谢！ 2011-01-22 09:00:30
silicare(金币+2): 谢谢分享 2011-01-22 11:09:22
这个转染的时间根据细胞的密度吧，我一般5000细胞每孔种入24孔板。待细胞长到60——70%的时候开始转染，这个看细胞系，有的细胞长的快，种完后需要的时间短些。转染完后我们做luciferase，都是24小时后收取细胞。
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5楼2011-01-22 00:37:18
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26264716

铁虫 (小有名气)
★
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我也有这样的疑问。。
我转293T细胞，以前分后24H转，用lipo2000，效果好。。6h换液，48h-72h收样。。。。
效果不错。。
但这次分了后发现细胞不够，准备尝试下楼上说的48h内转。。。希望有好的结果。。。。
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6楼2013-03-07 19:23:09
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peng5053

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
对于细胞转染，一般在细胞中期转染，转染效率会相对高一些。这个时候的细胞状态是最好的。对于HEK293T来说，一般转染的最佳时间是在传代后24hr以内。转染后48hr，外源基因肯定是有表达的。至于72hr，应该也还是有表达的，可能表达量会很低，主要是这个时间点的细胞大部分都衰老了。建议293T收集细胞，在转染后36-48hr收集。
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7楼2013-03-08 11:33:17
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louisa俊

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
293T的话，控制好细胞数，第二天就可以转了。。。
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8楼2013-11-19 14:51:49
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