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sanmaoecho

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细胞系转染的时间探讨

想了解一下大家做细胞转染时的几个小细节：1、对于293、293T这种贴壁不是很紧的细胞系，大家都是分了细胞之后多长时间做转染呢？或者细胞长到那种密度做转染呢？2、转染之后大家都是多久收细胞呢？或者是多大密度收细胞呢？3、转染之后的细胞如果很长时间不收，例如48h~72h不收细胞，转进去的外源基因还有没有表达呢？表达量怎么样呢？希望和有经验的大侠探讨一下啊
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1楼 2011-01-21 14:19:14
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peng5053

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
对于细胞转染，一般在细胞中期转染，转染效率会相对高一些。这个时候的细胞状态是最好的。对于HEK293T来说，一般转染的最佳时间是在传代后24hr以内。转染后48hr，外源基因肯定是有表达的。至于72hr，应该也还是有表达的，可能表达量会很低，主要是这个时间点的细胞大部分都衰老了。建议293T收集细胞，在转染后36-48hr收集。
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7楼2013-03-08 11:33:17
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feng__

金虫 (著名写手)
sanmaoecho(金币+1): 2011-01-21 17:31:01
1,  铺板24-48转染   主要看你铺的密度  想24H的话可以1W每孔

2，脂质体转染24H够了，不过我们做的时候不收细胞，直接做flipr

3, 48H还没神马问题的，72就不知道了
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2楼2011-01-21 16:05:35
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sanmaoecho

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by feng__ at 2011-01-21 16:05:35:
1,  铺板24-48转染   主要看你铺的密度  想24H的话可以1W每孔

2，脂质体转染24H够了，不过我们做的时候不收细胞，直接做flipr

3, 48H还没神马问题的，72就不知道了

谢谢！如果我想在铺板之后16h或者更短的时间内做转然可以吗？用的是维格拉斯的VigoFect脂质体
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3楼2011-01-21 17:33:44
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feng__

金虫 (著名写手)
sanmaoecho(金币+1): 谢谢！ 2011-01-22 09:00:17
引用回帖:
Originally posted by sanmaoecho at 2011-01-21 17:33:44:

谢谢！如果我想在铺板之后16h或者更短的时间内做转然可以吗？用的是维格拉斯的VigoFect脂质体

细胞铺的密一点就行了
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4楼2011-01-22 00:12:16
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