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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大量培养 诱导 蛋白没有差异表达
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zhaofangyu

新虫 (初入文坛)

[求助] 大量培养 诱导 蛋白没有差异表达 已有1人参与

我最近在做一个蛋白的原核表达，在做小量培养，诱导后，跑SDS PAGA胶可以看到有差异表达（IPTG诱导后蛋白油很明显的表达），然而在扩大培养 (2L的培养瓶中 500ml)培养，培养条件和小量表达完全一样。可以完全不表达。菌体速度生长很快。急求解答！！！
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1楼 2013-06-19 10:42:04
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaofangyu at 2013-06-19 15:01:40
是的 OD值达到0.6至0.8之间，再做的诱导。...

可能是大瓶与小规模时通气量不同。有时候是这样的。你可以试试逐步扩大体系，做一个100ml的看看。
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8楼2013-06-20 00:37:48
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定大量培养诱导时菌的OD与小量培养时的完全一样吗？
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2楼2013-06-19 11:33:00
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shzhao113

禁虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-20 09:12:13
本帖内容被屏蔽
3楼2013-06-19 13:22:59
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一壶月光

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-20 09:12:22
你的表达宿主是大肠吧，小量培养诱导表达过程的条件是怎样的啊？
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4楼2013-06-19 14:54:40
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zhaofangyu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-19 11:33:00
确定大量培养诱导时菌的OD与小量培养时的完全一样吗？

是的 OD值达到0.6至0.8之间，再做的诱导。
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5楼2013-06-19 15:01:40
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zhaofangyu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 一壶月光 at 2013-06-19 14:54:40
你的表达宿主是大肠吧，小量培养诱导表达过程的条件是怎样的啊？

挑单克隆在平板上扩增之后，用15ml培养基（2yt培养基）37° ，200转培养，OD值达到0.6-0.8之间时。加入IPTG。30°，200转诱导3小时。
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6楼2013-06-19 15:07:11
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zhaofangyu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-19 11:33:00
确定大量培养诱导时菌的OD与小量培养时的完全一样吗？

是的 ，完全一样。只是体系变大了。小量表达是15ml.大量表达是500ml.温度，IPTG浓度都是一样的。
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7楼2013-06-19 15:09:17
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欧阳-90

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我是新手啊，不是很懂。小试是不是加了IPTG菌体生长速度没有大瓶加IPTG后长得快？你试试大瓶的IPTG浓度提高
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9楼2013-07-02 12:13:15
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lkjwyh

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

小试是不是加了IPTG菌体生长速度没有大瓶加IPTG后长得快？你试试大瓶的IPTG浓度提高
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10楼2013-12-04 13:48:31
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