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caizijin

木虫 (小有名气)

[交流] 细胞密度降一半,蛋白表达量不变-重组CHO细胞表达蛋白

本人做重组CHO细胞表达蛋白,在3L和30L发酵罐上做发酵,采用国产基础培养基培养,流加培养基是同一公司生产的,3L罐采用液体流加培养基F1,流加培养基中添加300g/L 的葡萄糖,体积比F1:葡萄糖=2:1,终糖浓度117g/L,30L罐采用同样配方的干粉流加培养基配制,配制过程按厂家说明书,配制过程直接添加固体葡萄糖一起溶解,终糖浓度133.3g/L,流加过程控制糖浓度,按糖消耗量预测次日糖消耗量,根据流加培养基糖浓度计算流加体积。最终发酵结果显示,3L罐的最高细胞密度可达到1.5*10的7次方,而30L罐的最高细胞密度仅为3L罐的一半,但ELISA检测蛋白含量差不多,无法解释这个现象,是否有高手帮忙解答一下。
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小木虫一枚
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白木清水

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这就涉及到细胞罐的放大~就这点信息。。你的细胞密度跟你3L第几天有差距的?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-06-04 18:39:53
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3楼2015-06-04 19:11:28
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renbingling

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
说句实话,楼主的培养基的渗透压估计已经严重爆表了吧!
细胞大规模培养工艺
4楼2015-06-08 08:39:44
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匿名

本帖仅楼主可见
5楼2015-06-08 08:54:45
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纳米之心

木虫 (文坛精英)

祝福楼主
火星人要回火星了!!!
6楼2015-06-08 09:01:37
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这种情况说不清啊,CHO细胞转染适合构建稳定细胞系从而生产大量蛋白,培养30L也太浪费质粒培养基啥的了吧,而且没有菌污染么,换个293瞬转试试,还有培养3L的你得到了多少蛋白?用了多少质粒啊  30L 呢
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-10-20 15:45:16
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Jaky_chen

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
VCD下降一半而最终的表达量基本不便的情况,一般不会出现,所以要看你的表达量在什么水平上,如果是表达量很低的话就没什么好奇怪的了(看到你是用ELISA检测的,表达量估计不高)。不过你的pVCD能到17*E6/mL,按目前行业内的水平算,表达量至少要到2 g/L以上,如果不到的话,可能是一些特殊原因造成的吧?

还是要具体问题具体分析的,不过现在F12很少有人用在CHO了吧。
8楼2015-10-29 13:18:31
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