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如何调整实验条件优化qPCR的效率 已有2人参与
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大虾们，我试图通过稀释质粒标本构建应用于qPCR的标准曲线。采用的是Taqman MGB探针，目的拷贝数范围在10^1-10^6不等，因此需要配置相应的标准品。在建方法的时候，遇到了如下的问题，首先是qPCR的效率不如意（一般在-3.33附近，可以满足90%-110%之间，但是我只有70%左右）。还有就是低浓度的cp值跑不开，区分度不是很好。不知道有什么建议可以帮助到我，十分感谢！下图是前几次实验的结果仅供参考。25ul的体系中，1ul的引物以及1ul的taqman（均为10ng/ul的工作浓度），12.5的life mixII，之后根据需求配制模板和水的比例。退火延伸温度62摄氏度1min，循环数45。[img][/img] DSC_0002.JPG |
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