| 查看: 3144 | 回复: 6 | ||
[求助]
如何调整实验条件优化qPCR的效率 已有2人参与
|
大虾们，我试图通过稀释质粒标本构建应用于qPCR的标准曲线。采用的是Taqman MGB探针，目的拷贝数范围在10^1-10^6不等，因此需要配置相应的标准品。在建方法的时候，遇到了如下的问题，首先是qPCR的效率不如意（一般在-3.33附近，可以满足90%-110%之间，但是我只有70%左右）。还有就是低浓度的cp值跑不开，区分度不是很好。不知道有什么建议可以帮助到我，十分感谢！下图是前几次实验的结果仅供参考。25ul的体系中，1ul的引物以及1ul的taqman（均为10ng/ul的工作浓度），12.5的life mixII，之后根据需求配制模板和水的比例。退火延伸温度62摄氏度1min，循环数45。[img][/img] DSC_0002.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有169人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助qPCR,，引物的扩增效率，二聚体相关
已经有4人回复
- 关于in-fusion PCR问题
已经有27人回复
- 关于定量PCR做基因表达量的疑问
已经有3人回复
- 求助QPCR扩增效率的影响因素
已经有10人回复
- 溶解曲线不好荧光定量pcr的数据就用不了吗？
已经有13人回复
- 【求助】关于PWSCF结构优化效率低的问题
已经有12人回复
- 请大神帮我看看我的实时定量PCR结果 分析一下失败的原因 有图有真相
已经有3人回复
- RT-PCR扩增效率
已经有7人回复
- 荧光定量双峰的问题
已经有10人回复
- PCR重复不出来
已经有7人回复
- 求助！荧光定量PCR标准曲线制作至少要几个梯度
已经有6人回复
- QPCR之 扩增效率
已经有8人回复
- QPCR扩增效率太低
已经有20人回复
- QPCR之 扩增效率
已经有8人回复
- qPCR的标准曲线成线性很差，扩增效率低，是什么原因
已经有6人回复
- 求高人指点qpcr问题，扩增效率太高！
已经有14人回复
- RT—PCR引物、条带问题，新手求助，求意见，求建议！
已经有9人回复
- 请教PCR高手，使用SYBR Green I法进行荧光定量PCR对于产物大小有什么要求？
已经有21人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（一）
已经有20人回复
- 【分享】realtime pcr 个人经验分享
已经有41人回复
2楼2015-06-01 23:33:48
xuebaobingyu
金虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2331.7
- 红花: 1
- 帖子: 691
- 在线: 181.8小时
- 虫号: 1635351
- 注册: 2012-02-22
- 专业: 抗肿瘤药物药理
3楼2015-06-01 23:44:45
4楼2015-06-03 15:20:28
5楼2015-06-03 15:22:40
xuebaobingyu
金虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2331.7
- 红花: 1
- 帖子: 691
- 在线: 181.8小时
- 虫号: 1635351
- 注册: 2012-02-22
- 专业: 抗肿瘤药物药理
6楼2015-06-03 21:16:14
1322324659
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 615.9
- 散金: 7
- 帖子: 56
- 在线: 7.3小时
- 虫号: 3710576
- 注册: 2015-03-04
- 专业: 临床微生物学检验
7楼2015-06-23 11:21:42
