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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 纯化蛋白，蛋白分子量比较大，先过镍柱之后，之后做离子交换色谱还是超滤比较好
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我是丫丫

木虫 (正式写手)

[交流] 纯化蛋白，蛋白分子量比较大，先过镍柱之后，之后做离子交换色谱还是超滤比较好

我第一次纯化分子量很大的蛋白，有HIS标签，所以打算先过镍柱，然后透析出盐，接下来是用超滤比较好还是离子交换色谱好还是其余的方法？没有做过离子交换色谱，求虫友建议，多谢，哪个成本比较低~
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一颗自由的心不知是被身体束缚还是梦想
1楼 2015-05-20 16:25:52
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lomis

木虫 (正式写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-21 22:59:16
你看你这么多步骤，到最后估计也剩下不了什么了。
何不比较一下Ni柱和离子交换的效率，选一种，然后再优化一下不就好了？

按照方法的简易度来说肯定是超滤。
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没有命运，只有选择！
2楼2015-05-21 11:33:11
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-21 22:59:32
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3楼2015-05-21 20:50:28
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xscljl

银虫 (初入文坛)
★ ★
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我是丫丫: 金币+1 2015-05-24 10:50:57
你该先看看经过Ni-柱纯化后的蛋白纯度和浓度（即透析除盐后跑个SDS-PAGE，考马斯亮蓝染一下色，看看有没有杂带）。如果杂带较多，且分子量与目的蛋白差别不是很大，超滤没效果；若杂带较少，目的蛋白浓度还行，跟着你的实验目的要求，确定是否有必要继续浓缩或纯化；有一点是离子交换前，上样蛋白浓度最好大一些，之后流出液蛋白浓度才能尽量符合你的要求。
      总之，需要跟着你的实验要求和蛋白本身的可溶性确定用什么方法纯化。
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4楼2015-05-24 07:12:58
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3q2002

银虫 (小有名气)
★
我是丫丫: 金币+1 2015-05-24 10:50:38
先离子交换，在Ni
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5楼2015-05-24 09:04:45
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