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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化的高手指点呀，阳离子交换层析的条件选择
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yuanalice

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化的高手指点呀，阳离子交换层析的条件选择

我需要纯化的目的蛋白等电点为9.0，想用CM Sepharose F F柱纯化，之前的师兄用的是0-1M NaCL的50mM，pH 4.5 的NaAC的缓冲液线性梯度洗脱，可是我看群里讨论的多数使用磷酸盐缓冲液，想问问这两种不同的缓冲液有什么区别呢？是不是分离蛋白的效果不同呀！
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1楼2013-02-27 12:40:57
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yuanalice: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-02-28 01:11:49
磷酸盐用的比较多，根据个人的喜好吧，区别肯定是有的，应该不会太大。
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2楼2013-02-27 13:15:06
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yuanalice: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-02-28 01:11:35
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-01 01:13:13
你的蛋白质等电点是9.0，而你要用4.5的缓冲液，相差这么多，你不怕你的蛋白质不稳定吗？一般来说，离子交换的时候，偏离开等电点1-2个pH就足够了，pH相差越大，蛋白质反而不稳定。因此，建议你尝试pH7.0的缓冲液，Tirs-HCl、磷酸盐缓冲液或者HEPES，都可以。
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3楼2013-02-27 13:50:00
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yuanalice

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-02-27 13:50:00
你的蛋白质等电点是9.0，而你要用4.5的缓冲液，相差这么多，你不怕你的蛋白质不稳定吗？一般来说，离子交换的时候，偏离开等电点1-2个pH就足够了，pH相差越大，蛋白质反而不稳定。因此，建议你尝试pH7.0的缓冲液，T ...

要是用PH4.5的缓冲溶液，不是等电点在这附近的蛋白质会比较不稳定吗，容易沉淀，为什么PH相差越大越不稳定呢，你能不能详细解释一下呀！很感谢你的回复！
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4楼2013-02-28 01:11:17
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-02-28 10:40:03
你的蛋白等电点不是9.0吗？难道是你写错了或者我看错了？总之是采用的缓冲液最好不要超过等电点太远，否则蛋白质是不稳定的，一般来说，我都用偏离1.5左右，如果要确保离子交换能吸附上，那么两个pH的偏差也足够了。如果PI=9.0，而你用pH=4.5的话，第一是蛋白不一定稳定（只是不一定，具体是不是这样因蛋白而论），第二，在离子交换上吸附太牢固，不容易洗脱下来。而且会有更多的杂质吸附上去，不合算。
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5楼2013-02-28 08:39:07
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yuanalice

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-02-28 08:39:07
你的蛋白等电点不是9.0吗？难道是你写错了或者我看错了？总之是采用的缓冲液最好不要超过等电点太远，否则蛋白质是不稳定的，一般来说，我都用偏离1.5左右，如果要确保离子交换能吸附上，那么两个pH的偏差也足够了。 ...

我的意思是等电点在4.5左右的蛋白会不稳定的，蛋白质在等电点附近容易沉淀吧，明白你的意思了，多谢你的意见呀！
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6楼2013-02-28 10:08:53
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李小坦儿

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我最近也在做阳离子交换层析 我的蛋白的等电点在9.65左右 我用的是pH6.5的MES溶液 目的蛋白大多数都穿透出去了 最后用1M的NaCl洗下来一些目的蛋白 纯度倒是还可以 唉 ~我想问一下 阳离子交换色谱可以使用Tris-HCl 缓冲液么？
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金戈铁马你要等我
7楼2013-02-28 15:00:58
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们一般都是用TRis缓冲液的，你说的那两种缓冲液多少肯定有区别，实验嘛对于不同的蛋白就得用不同的方法和缓冲液去摸索，当然那缓冲液的PH值也值得你去摸索的，因为PH跟等电点确实是差很多，对蛋白不好。
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8楼2013-03-01 09:03:54
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yuanalice

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-02-27 13:50:00
你的蛋白质等电点是9.0，而你要用4.5的缓冲液，相差这么多，你不怕你的蛋白质不稳定吗？一般来说，离子交换的时候，偏离开等电点1-2个pH就足够了，pH相差越大，蛋白质反而不稳定。因此，建议你尝试pH7.0的缓冲液，T ...

你好，你说的磷酸盐缓冲液是PB吗
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9楼2013-03-04 09:23:37
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半角天空

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuanalice at 2013-02-28 01:11:17
要是用PH4.5的缓冲溶液，不是等电点在这附近的蛋白质会比较不稳定吗，容易沉淀，为什么PH相差越大越不稳定呢，你能不能详细解释一下呀！很感谢你的回复！...

易变性
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10楼2015-12-22 13:27:14
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