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我是丫丫

木虫 (正式写手)

[交流] 纯化蛋白,蛋白分子量比较大,先过镍柱之后,之后做离子交换色谱还是超滤比较好

我第一次纯化分子量很大的蛋白,有HIS标签,所以打算先过镍柱,然后透析出盐,接下来是用超滤比较好还是离子交换色谱好还是其余的方法?没有做过离子交换色谱,求虫友建议,多谢,哪个成本比较低~
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mataomatao

禁虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-21 22:59:32
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3楼2015-05-21 20:50:28
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lomis

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-21 22:59:16
你看你这么多步骤,到最后估计也剩下不了什么了。
何不比较一下Ni柱和离子交换的效率,选一种,然后再优化一下不就好了?

按照方法的简易度来说肯定是超滤。
没有命运,只有选择!
2楼2015-05-21 11:33:11
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xscljl

银虫 (初入文坛)

★ ★
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我是丫丫: 金币+1 2015-05-24 10:50:57
你该先看看经过Ni-柱纯化后的蛋白纯度和浓度(即透析除盐后跑个SDS-PAGE,考马斯亮蓝染一下色,看看有没有杂带)。如果杂带较多,且分子量与目的蛋白差别不是很大,超滤没效果;若杂带较少,目的蛋白浓度还行,跟着你的实验目的要求,确定是否有必要继续浓缩或纯化;有一点是离子交换前,上样蛋白浓度最好大一些,之后流出液蛋白浓度才能尽量符合你的要求。
      总之,需要跟着你的实验要求和蛋白本身的可溶性确定用什么方法纯化。
4楼2015-05-24 07:12:58
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3q2002

银虫 (小有名气)


我是丫丫: 金币+1 2015-05-24 10:50:38
先离子交换,在Ni
5楼2015-05-24 09:04:45
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