| 查看: 2004 | 回复: 7 | |||
[求助]
DEAE——Sepharose离子交换纯化 流速变慢
|
|
在做DEAE——Sepharose Fast Flow离子交换纯化酶的研究，是用的NaCl梯度洗脱，刚开始流速正常，但经过7-8小时后流速就变慢了，需要再次提高泵的转速，之后7-8小时后再次变慢，需要再次提高泵的转速； 我用的是2年前师姐用过的柱材料，分离效果还不错，但就是出现流速变慢的情况；蠕动泵是上海沪西的；上样前样液已经过0.44um膜过滤了；是NaCl浓度逐渐增加导致的问题吗？我上样的体积比较大，是不是样品量太大把柱子堵了?但是梯度洗脱前用缓冲液冲洗杂蛋白的时候没有堵啊？ 还是别的原因请各位高手给小弟分析分析。 [ Last edited by 小李爱学习 on 2013-5-29 at 10:42 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
明天应该可查了！？
已经有5人回复
-
如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》
已经有7人回复
-
没有任何消息-是不是就凉了
已经有8人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
人气不行了
已经有10人回复
-
我面上完蛋了
已经有10人回复
-
能否退出参与的面上项目解除限项
已经有24人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有17人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- DEAE Sepharose-CL6B凝胶柱层析纯化阿拉伯木聚糖
已经有6人回复
- DEAE-Sepharose FF层析柱规格 及填料的预处理
已经有10人回复
- 蛋白纯化的高手指点呀，阳离子交换层析的条件选择
已经有9人回复
- 与多糖相关的前辈们帮帮忙啊
已经有9人回复
- Q-Sepharose Fast Flow 纯化蛋白遇到的棘手问题
已经有11人回复
- EDEAE-Sepharose FF层析柱规格 及填料的预处理
已经有6人回复
- DEAE-52纤维素能否用DEAE Sepharose fast flow替换使用呢？
已经有7人回复
- 黑木耳多糖的分级纯化
已经有17人回复
- 求教离子交换柱纯化蛋白的问题
已经有28人回复
- 关于Q Sepharose® Fast Flow 阴离子交换柱挂柱问题
已经有8人回复
- 买回来的存于乙醇中的DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换柱怎样预处理啊
已经有7人回复
- 重金求助关于离子交换树脂层析柱分离中性多糖的操作，先行谢谢各位
已经有15人回复
- 怎么样选择层析柱、DEAE纤维素型号
已经有7人回复
- 使用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化蛋白后杂蛋白的洗脱
已经有7人回复
- 【求助/交流】又没人用过Q Sepharose® Fast Flow这种阴离子交换柱，请教一下洗脱
已经有11人回复
- DEAE sepharose fast flow
已经有4人回复
ynkuaile
木虫 (小有名气)
- BioEPI: 2
- 应助: 86 (初中生)
- 金币: 1757.7
- 红花: 4
- 帖子: 270
- 在线: 73.4小时
- 虫号: 982579
- 注册: 2010-03-26
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2013-05-29 13:41:11
3楼2013-05-29 15:45:58
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19818.5
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6621
- 在线: 2794小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
4楼2013-05-29 16:01:56
lihuan0525
金虫 (职业作家)
- BioEPI: 1
- 应助: 565 (博士)
- 金币: 2155
- 散金: 687
- 红花: 15
- 帖子: 3301
- 在线: 551.8小时
- 虫号: 1292024
- 注册: 2011-05-11
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
5楼2013-05-30 15:37:21
6楼2013-05-30 23:27:02
ynkuaile
木虫 (小有名气)
- BioEPI: 2
- 应助: 86 (初中生)
- 金币: 1757.7
- 红花: 4
- 帖子: 270
- 在线: 73.4小时
- 虫号: 982579
- 注册: 2010-03-26
- 专业: 生物大分子结构与功能
★ ★ ★
wizardfan: 金币+3, 谢谢补充 2013-05-31 08:21:19
wizardfan: 金币+3, 谢谢补充 2013-05-31 08:21:19
|
其实其他人说的都对，都是该考虑的地方，我为何只说泵的原因是因为我觉得你过柱子的装置。你用的泵是国产的蠕动泵，他的原理就是3个铁杆旋转推动压紧的皮管往前出水，流速是通过铁杆与皮管压紧程度来控制的，所以我觉得时间一长他压紧的程度就不准了，变松了，流速就慢了。此外3楼4楼说的很对，手动装的柱子，时间一长，填料是会被压缩的，5楼说的是非常正确的，是这个问题的关键。可惜你没法检测压力，不好观察。现在你能够得到目标蛋白就算顺利，考虑下一步试验赶紧做。如果非要改进，我觉得你过柱时间真的太长了，7-8小时，之后再7-8小时。蛋白与树脂结合力很强可以提高流速，担心压力大压坏填料的话就换粗一点的柱子。我用GE的5mL预装柱，一般流速5mL/min,上样怕不结合我会降低到3mL/min,洗脱洗20个柱体积。还是很快的。仅供参考。 |
7楼2013-05-31 00:41:59
8楼2013-05-31 08:08:19
20