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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » DEAE Sepharose-CL6B凝胶柱层析纯化阿拉伯木聚糖
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xiaozhe026

新虫 (初入文坛)

[交流] DEAE Sepharose-CL6B凝胶柱层析纯化阿拉伯木聚糖 已有3人参与

最近在做DEAE  Sepharose-CL6B凝胶柱层析纯化阿拉伯木聚糖的实验，用的层析柱还有自动收集仪。看到有些文献上是先用H2O、再用0.1mol/l的NaCl洗脱，但是不知道先用H2O洗脱多久才换用NaCl洗脱？还有怎样判断样品已经洗脱完了呢？（我是把收集的洗脱液显色后测定吸光度，总不能洗脱100管挨个测吧，这也太无奈了）上张文献上的图。请问有哪位大侠做过这些的，求助啊~~

洗脱图谱

[ Last edited by xiaozhe026 on 2013-4-18 at 21:15 ]
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1楼 2013-04-18 21:02:22
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ldycaams

铜虫 (正式写手)
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为什么需要色谱分离阿拉伯木聚糖？这个东西可以大量提取获得才对呀？
洗脱液OD值和总糖含量关系可能不大。用地衣酚盐酸法测定总戊糖是靠谱的方法。
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2楼2013-04-20 20:43:37
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xiaozhe026

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ldycaams at 2013-04-20 20:43:37
为什么需要色谱分离阿拉伯木聚糖？这个东西可以大量提取获得才对呀？
洗脱液OD值和总糖含量关系可能不大。用地衣酚盐酸法测定总戊糖是靠谱的方法。

我是想用层析的方法洗脱得到不同分子量的阿拉伯木聚糖，层析之后再用高效液相检测其分子量大小，最终能得到某一数量级的阿拉伯木聚糖，如100000.
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3楼2013-04-22 14:13:32
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lezai945

新虫 (小有名气)
★
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理论上讲：每管都测一下OD值，才能确定哪些管可能是单一组分，主要还是便于收集。不过，也有偷懒的，就是隔管检测，你可以考虑一下隔几管测一下。
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4楼2013-04-22 16:41:28
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xiaozhe026

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lezai945 at 2013-04-22 16:41:28
理论上讲：每管都测一下OD值，才能确定哪些管可能是单一组分，主要还是便于收集。不过，也有偷懒的，就是隔管检测，你可以考虑一下隔几管测一下。

嗯，是的啊，我是隔管测的。我看文献上是先用DEAE Sepharose-CL6B阴离子交换柱层析，像上面图中有三个洗脱峰，就代表有三个糖组分，我不太明白为什么只根据洗脱峰就可以判定是不同的糖组分呢。然后再用Sepharose-CL4B凝胶色谱柱层析，也是根据洗脱峰判定，总觉得有点牵强
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5楼2013-04-22 19:09:16
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kobe杰

银虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by xiaozhe026 at 2013-04-22 19:09:16
嗯，是的啊，我是隔管测的。我看文献上是先用DEAE Sepharose-CL6B阴离子交换柱层析，像上面图中有三个洗脱峰，就代表有三个糖组分，我不太明白为什么只根据洗脱峰就可以判定是不同的糖组分呢。然后再用Sepharose-C ...

这么说吧，你觉得同一个糖组分会在2个流动液里面分别流出来吗？
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6楼2013-04-23 16:55:26
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xiaozhe026

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by kobe杰 at 2013-04-23 16:55:26
这么说吧，你觉得同一个糖组分会在2个流动液里面分别流出来吗？...

不同的洗脱剂是应该洗脱得到不同的洗脱峰，嗯，明白了。至于得到的是不是一样的组分，后面还需再用其他方法检测一下。请问你做多糖的层析纯化吗
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7楼2013-04-24 09:43:17
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