| 查看: 2294 | 回复: 4 | |||
[交流]
DEAE sepharose fast flow
|
|
各位虫虫好： 大家好，我现在在做一个环肽的纯化，出了问题，我把问题说一下，大家帮我分析一下哪出问题了。 我的实验过程是这样的：DEAE sepharose FF树脂处理，水洗掉乙醇，用1mol氢氧化钠活化半小时，水洗至中性，然后用上样缓冲液（10mmol，pH7.6的磷酸盐）浸泡脱气（为了使树脂pH尽快平衡至7.6）1h，然后装柱，再用上样缓冲液平衡至柱床体积恒定。然后用1molNaCl/10nmol，pH7.6的磷酸盐再生柱子，然后再用上样缓冲液洗5个柱体积。上样，样品是经过冻干后溶在上样缓冲液里的。然后用0.05molNaCl/10mmol，pH7.6洗脱未挂柱的杂质，然后用另外一个高盐浓度洗脱目的物。去年7-10月份做出来效果非常好，重现性也非常好，几乎每次做出来结果都一样，在0.05和上样缓冲液洗脱主要杂质，高盐时洗脱目的物，而且没有主要杂质。 然后我11月份停了一个月后，12月份再做就出现情况了。同样的条件，同样的试剂，同样的样品，目的物不挂柱了，在低盐甚至在无盐时和杂质一起洗脱下来。今年3月份到现在，目的物还是没挂住，一直不能重现出来。我想中间只有变化的是天气，没其他情况了。 大家帮我分析下，是什么原因。还有温度对离子交换影响真的这么大吗？还有个问题，我把1mol氯化钠溶解在1L缓冲液里，pH怎么会低了1.0个pH。谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有7人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
明天应该可查了！？
已经有5人回复
-
如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》
已经有7人回复
-
没有任何消息-是不是就凉了
已经有8人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
人气不行了
已经有10人回复
-
我面上完蛋了
已经有10人回复
-
能否退出参与的面上项目解除限项
已经有24人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有17人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- DEAE-Sepharose fast flow的中文全称叫什么？
已经有0人回复
- DEAE sepharose fast flow有气泡
已经有0人回复
- 纯化蛋白时，能否用DEAE Sepharose fast flow替换DEAE-52纤维素使用呢？
已经有0人回复
- DEAE-52纤维素能否用DEAE Sepharose fast flow替换使用呢？
已经有1人回复
- 离子交换层析问题，急！！！
已经有1人回复
- DEAE Sepharose Fast Flow 纯化问题
已经有1人回复
- DEAE-Sepharose Fast Flow column纯化问题，求高手指教
已经有9人回复
- DEAE Sepharose Fast Flow洗脱问题
已经有2人回复
- DEAE——Sepharose离子交换纯化 流速变慢
已经有7人回复
- 蛋白分离时酶活峰太宽
已经有0人回复
- DEAE-Sepharose Fast Flow 长时间放置后如何处理
已经有13人回复
- 层析分离酶
已经有3人回复
- 多糖纯化
已经有4人回复
- 请教，DEAE-52与DEAE Sepharose Fast Flow该如何选用
已经有0人回复
- DEAE-Sepharose Fast Flow及Sephacryl S-300 试剂购买
已经有1人回复
- DEAE Sepharose fast flow分离多糖的吸附载量多大啊？
已经有4人回复
- DEAE-52纤维素能否用DEAE Sepharose fast flow替换使用呢？
已经有7人回复
- DEAE-Sepharose Fast Flow 活化可以用酸吗？
已经有2人回复
- 使用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化蛋白后杂蛋白的洗脱
已经有7人回复
- 【求助】蛋白/酶纯化层析柱选择问题
已经有6人回复
wuweibewin
金虫 (正式写手)
- 博学EPI: 14
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 673.3
- 散金: 195
- 红花: 8
- 帖子: 634
- 在线: 42.8小时
- 虫号: 738179
- 注册: 2009-04-02
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
2楼2010-04-22 20:32:57
3楼2010-04-22 20:46:07
4楼2010-04-22 22:31:51
5楼2010-04-22 22:32:34
20