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DEAE sepharose fast flow
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各位虫虫好： 大家好，我现在在做一个环肽的纯化，出了问题，我把问题说一下，大家帮我分析一下哪出问题了。 我的实验过程是这样的：DEAE sepharose FF树脂处理，水洗掉乙醇，用1mol氢氧化钠活化半小时，水洗至中性，然后用上样缓冲液（10mmol，pH7.6的磷酸盐）浸泡脱气（为了使树脂pH尽快平衡至7.6）1h，然后装柱，再用上样缓冲液平衡至柱床体积恒定。然后用1molNaCl/10nmol，pH7.6的磷酸盐再生柱子，然后再用上样缓冲液洗5个柱体积。上样，样品是经过冻干后溶在上样缓冲液里的。然后用0.05molNaCl/10mmol，pH7.6洗脱未挂柱的杂质，然后用另外一个高盐浓度洗脱目的物。去年7-10月份做出来效果非常好，重现性也非常好，几乎每次做出来结果都一样，在0.05和上样缓冲液洗脱主要杂质，高盐时洗脱目的物，而且没有主要杂质。 然后我11月份停了一个月后，12月份再做就出现情况了。同样的条件，同样的试剂，同样的样品，目的物不挂柱了，在低盐甚至在无盐时和杂质一起洗脱下来。今年3月份到现在，目的物还是没挂住，一直不能重现出来。我想中间只有变化的是天气，没其他情况了。 大家帮我分析下，是什么原因。还有温度对离子交换影响真的这么大吗？还有个问题，我把1mol氯化钠溶解在1L缓冲液里，pH怎么会低了1.0个pH。谢谢！ |
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4楼2010-04-22 22:31:51
wuweibewin
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