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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DEAE——Sepharose离子交换纯化 流速变慢
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小李爱学习

银虫 (正式写手)

[求助] DEAE——Sepharose离子交换纯化 流速变慢

在做DEAE——Sepharose Fast Flow离子交换纯化酶的研究，是用的NaCl梯度洗脱，刚开始流速正常，但经过7-8小时后流速就变慢了，需要再次提高泵的转速，之后7-8小时后再次变慢，需要再次提高泵的转速；
我用的是2年前师姐用过的柱材料，分离效果还不错，但就是出现流速变慢的情况；蠕动泵是上海沪西的；上样前样液已经过0.44um膜过滤了；是NaCl浓度逐渐增加导致的问题吗？我上样的体积比较大，是不是样品量太大把柱子堵了?但是梯度洗脱前用缓冲液冲洗杂蛋白的时候没有堵啊？
还是别的原因请各位高手给小弟分析分析。

[ Last edited by 小李爱学习 on 2013-5-29 at 10:42 ]
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1楼 2013-05-29 09:53:07
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小李爱学习: 金币+2, ★有帮助, 没有压力测量工具 2013-05-31 08:08:43
不知道楼主有没有注意过压力，压力有没有变化，
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5楼2013-05-30 15:37:21
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小李爱学习: 金币+2, ★有帮助 2013-05-30 23:27:15
我觉得是你泵的原因。时间一长就不能恒速。我一般样品0.2μm的膜过滤。柱子是你自装的吗，体积多少？过7-8小时，这时间未免太长。
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2楼2013-05-29 13:41:11
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edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小李爱学习: 金币+5, ★★★很有帮助, 我也是打算下一步这么做的，多谢 2013-05-31 08:10:20
是你长时间上样，柱子压缩了，把柱子重悬应该就可以了。还有你的柱子用了那么长时间，可能有部分分解成更小的颗粒了，堵住了你的膜！
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3楼2013-05-29 15:45:58
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小李爱学习: 金币+1, ★有帮助, 填料没有变化，柱子装好后都是用较高流速压实了的 2013-05-31 08:09:49
填料变软了？你看看柱床体积变小了没。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2013-05-29 16:01:56
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