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[求助] RNA反转录成cDNA之后验证用什么引物已有4人参与

RNA提取反转成cDNA之后，要验证反转是否成功需要进行PCR反应，想请问一下，PCR反应要用的引物是通用的，还是要自己设计？另外，这是PCR反应是不是跟普通PCR加的试剂是一样的？

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1楼 2015-05-18 16:43:44

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晞朔

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7楼: Originally posted by 308047410 at 2015-05-18 17:37:53
我的是等足目的动物...

查找你专业相关文献，尤其是基因定量检测的，都会有内参基因的。

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10楼2015-05-18 18:12:29

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nuoyaeva

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看你的专业，估计你是要建库测序吧。
1. 如果你提取的RNA没有经过消化处理呢，可以在逆转录之后用常规的PCR检测。同时，你可以设置个阴性对照，就是用你的RNA再设置一管逆转录，只是不加逆转录酶，之后也进行PCR。
2. 如果你的RNA是经过RNA酶消化打断的，那就只能用一些特定得荧光染料了，这些染料会根据单链和双链的不同给出不同强度的信号。

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2楼2015-05-18 16:54:33

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2楼: Originally posted by nuoyaeva at 2015-05-18 16:54:33
看你的专业，估计你是要建库测序吧。
1. 如果你提取的RNA没有经过消化处理呢，可以在逆转录之后用常规的PCR检测。同时，你可以设置个阴性对照，就是用你的RNA再设置一管逆转录，只是不加逆转录酶，之后也进行PCR。 ...

只是提出来了RNA，还没有做任何处理，想要反转成模版，用于普通PCR

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3楼2015-05-18 17:10:38

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一样的，使用一些ｈｏｕｓｅｋｅｅｐｉｎｇ基因探针即可。看你是什么材料的，会有不同序列。

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4楼2015-05-18 17:20:01

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ACTIN 或者UBQ这些保守基因

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5楼2015-05-18 17:20:20

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5楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-05-18 17:20:20
ACTIN 或者UBQ这些保守基因

ACTIN 或者UBQ是引物的名称吗？刚接触分子，很多不懂，谢谢！

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6楼2015-05-18 17:37:05

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4楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-18 17:20:01
一样的，使用一些ｈｏｕｓｅｋｅｅｐｉｎｇ基因探针即可。看你是什么材料的，会有不同序列。

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7楼2015-05-18 17:37:53

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3楼: Originally posted by 308047410 at 2015-05-18 18:10:38
只是提出来了RNA，还没有做任何处理，想要反转成模版，用于普通PCR...

嗯，那你可以直接进行逆转录，然后用通用引物进行PCR即可。你也可以设置我提到的阴性对照，更能说明问题。

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8楼2015-05-18 17:40:06

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6楼: Originally posted by 308047410 at 2015-05-18 17:37:05
ACTIN 或者UBQ是引物的名称吗？刚接触分子，很多不懂，谢谢！...

不是，就是楼上所说的管家基因

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9楼2015-05-18 18:11:29

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