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308047410

新虫 (小有名气)

[求助] RNA反转录成cDNA之后验证用什么引物 已有4人参与

RNA提取反转成cDNA之后,要验证反转是否成功需要进行PCR反应,想请问一下,PCR反应要用的引物是通用的,还是要自己设计?另外,这是PCR反应是不是跟普通PCR加的试剂是一样的?
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

晞朔

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 308047410 at 2015-05-18 17:37:53
我的是等足目的动物...

查找你专业相关文献,尤其是基因定量检测的,都会有内参基因的。
10楼2015-05-18 18:12:29
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普通回帖

nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
308047410: 金币+1 2015-05-18 17:34:47
308047410: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2015-05-19 11:15:57
看你的专业,估计你是要建库测序吧。
1. 如果你提取的RNA没有经过消化处理呢,可以在逆转录之后用常规的PCR检测。同时,你可以设置个阴性对照,就是用你的RNA再设置一管逆转录,只是不加逆转录酶,之后也进行PCR。
2. 如果你的RNA是经过RNA酶消化打断的,那就只能用一些特定得荧光染料了,这些染料会根据单链和双链的不同给出不同强度的信号。
生活是美好的
2楼2015-05-18 16:54:33
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308047410

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by nuoyaeva at 2015-05-18 16:54:33
看你的专业,估计你是要建库测序吧。
1. 如果你提取的RNA没有经过消化处理呢,可以在逆转录之后用常规的PCR检测。同时,你可以设置个阴性对照,就是用你的RNA再设置一管逆转录,只是不加逆转录酶,之后也进行PCR。 ...

只是提出来了RNA,还没有做任何处理,想要反转成模版,用于普通PCR
3楼2015-05-18 17:10:38
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
308047410: 金币+1 2015-05-18 17:37:22
一样的,使用一些housekeeping基因探针即可。看你是什么材料的,会有不同序列。
4楼2015-05-18 17:20:01
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
308047410: 金币+1 2015-05-18 17:35:46
ACTIN 或者UBQ这些保守基因

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
5楼2015-05-18 17:20:20
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308047410

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-05-18 17:20:20
ACTIN 或者UBQ这些保守基因

ACTIN 或者UBQ是引物的名称吗?刚接触分子,很多不懂,谢谢!
6楼2015-05-18 17:37:05
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308047410

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-18 17:20:01
一样的,使用一些housekeeping基因探针即可。看你是什么材料的,会有不同序列。

我的是等足目的动物
7楼2015-05-18 17:37:53
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 308047410 at 2015-05-18 18:10:38
只是提出来了RNA,还没有做任何处理,想要反转成模版,用于普通PCR...

嗯,那你可以直接进行逆转录,然后用通用引物进行PCR即可。你也可以设置我提到的阴性对照,更能说明问题。
生活是美好的
8楼2015-05-18 17:40:06
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 308047410 at 2015-05-18 17:37:05
ACTIN 或者UBQ是引物的名称吗?刚接触分子,很多不懂,谢谢!...

不是,就是楼上所说的管家基因

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
9楼2015-05-18 18:11:29
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