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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA反转录成cDNA之后验证用什么引物
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308047410

新虫 (小有名气)

[求助] RNA反转录成cDNA之后验证用什么引物 已有4人参与

RNA提取反转成cDNA之后，要验证反转是否成功需要进行PCR反应，想请问一下，PCR反应要用的引物是通用的，还是要自己设计？另外，这是PCR反应是不是跟普通PCR加的试剂是一样的？
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1楼 2015-05-18 16:43:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

晞朔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 308047410 at 2015-05-18 17:37:53
我的是等足目的动物...

查找你专业相关文献，尤其是基因定量检测的，都会有内参基因的。
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10楼2015-05-18 18:12:29
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
308047410: 金币+1 2015-05-18 17:34:47
308047410: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2015-05-19 11:15:57
看你的专业，估计你是要建库测序吧。
1. 如果你提取的RNA没有经过消化处理呢，可以在逆转录之后用常规的PCR检测。同时，你可以设置个阴性对照，就是用你的RNA再设置一管逆转录，只是不加逆转录酶，之后也进行PCR。
2. 如果你的RNA是经过RNA酶消化打断的，那就只能用一些特定得荧光染料了，这些染料会根据单链和双链的不同给出不同强度的信号。
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生活是美好的
2楼2015-05-18 16:54:33
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308047410

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nuoyaeva at 2015-05-18 16:54:33
看你的专业，估计你是要建库测序吧。
1. 如果你提取的RNA没有经过消化处理呢，可以在逆转录之后用常规的PCR检测。同时，你可以设置个阴性对照，就是用你的RNA再设置一管逆转录，只是不加逆转录酶，之后也进行PCR。 ...

只是提出来了RNA，还没有做任何处理，想要反转成模版，用于普通PCR
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3楼2015-05-18 17:10:38
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
308047410: 金币+1 2015-05-18 17:37:22
一样的，使用一些ｈｏｕｓｅｋｅｅｐｉｎｇ基因探针即可。看你是什么材料的，会有不同序列。
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4楼2015-05-18 17:20:01
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
308047410: 金币+1 2015-05-18 17:35:46
ACTIN 或者UBQ这些保守基因

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天道酬勤
5楼2015-05-18 17:20:20
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308047410

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-05-18 17:20:20
ACTIN 或者UBQ这些保守基因

ACTIN 或者UBQ是引物的名称吗？刚接触分子，很多不懂，谢谢！
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6楼2015-05-18 17:37:05
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308047410

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-18 17:20:01
一样的，使用一些ｈｏｕｓｅｋｅｅｐｉｎｇ基因探针即可。看你是什么材料的，会有不同序列。

我的是等足目的动物
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7楼2015-05-18 17:37:53
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 308047410 at 2015-05-18 18:10:38
只是提出来了RNA，还没有做任何处理，想要反转成模版，用于普通PCR...

嗯，那你可以直接进行逆转录，然后用通用引物进行PCR即可。你也可以设置我提到的阴性对照，更能说明问题。
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生活是美好的
8楼2015-05-18 17:40:06
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 308047410 at 2015-05-18 17:37:05
ACTIN 或者UBQ是引物的名称吗？刚接触分子，很多不懂，谢谢！...

不是，就是楼上所说的管家基因

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天道酬勤
9楼2015-05-18 18:11:29
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