24小时热门版块排行榜    

查看: 2169  |  回复: 8

星乐之梦

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因敲除中转化子的筛选 已有2人参与

最近在做基因敲除的实验,利用的是同源重组的方法,所用的质粒载体是PDS3.0。(含有庆大抗性以及对蔗糖的敏感性)也就是说在双亲本杂交后目的转化子应该抗庆大,对蔗糖敏感。可是接合后疑似转化子的确可以在庆大的板子上生长,但奇怪的是在蔗糖的的平板中也可以而且长势基本一致。做了几次都是这样,无法挑真正取转化子,还请各位大神不吝赐教。在此谢过!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

棒哈哈

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
星乐之梦: 金币+3, 有帮助 2015-04-27 08:29:41
得到的转化子是多种类型的,有抗性不一定是真正的发生了同源重组的,而可能是抗性基因随机插入了目标基因组的,且这种转化子往往是占大多数的。要想得到真正的同源重组后的转化子,需要做相关验证,如:PCR,杂交(blot杂交或者Southern杂交)
2楼2015-04-21 12:55:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王丹2013

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2015-04-25 21:25:37
星乐之梦: 金币+2, 有帮助 2015-04-27 08:29:50
可能你的受体菌耐渗透压能力很强,这种情况下就不适合用蔗糖平板筛选了。建议先提高蔗糖浓度,如果发现转化子还是长势一致就果断换载体。
3楼2015-04-21 15:37:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星乐之梦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 棒哈哈 at 2015-04-21 12:55:01
得到的转化子是多种类型的,有抗性不一定是真正的发生了同源重组的,而可能是抗性基因随机插入了目标基因组的,且这种转化子往往是占大多数的。要想得到真正的同源重组后的转化子,需要做相关验证,如:PCR,杂交( ...

可是抗性基因是载体质粒上的,总不能脱离质粒独自进入宿主基因组吧,而且之后我也做过PCR验证结果表明重组质粒确实也导入基因组中,但对蔗糖的敏感性却无法解释。去年做的还好好的,今年做就变成了这样,感觉是不是菌让我放久了敏感性丧失了。。。
4楼2015-04-21 17:33:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星乐之梦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 王丹2013 at 2015-04-21 15:37:55
可能你的受体菌耐渗透压能力很强,这种情况下就不适合用蔗糖平板筛选了。建议先提高蔗糖浓度,如果发现转化子还是长势一致就果断换载体。

可是上学期我做的时候就不会出现这种情况,接合后受体菌由于质粒对蔗糖的敏感性在15%蔗糖中是不长的或是很弱的,也就说双亲本杂交后总是能轻松筛选到转化子,这学期不知道怎么了,状况百出。到底是受体菌,还是重组质粒的问题呢?
5楼2015-04-21 17:39:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王丹2013

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 星乐之梦 at 2015-04-21 17:39:55
可是上学期我做的时候就不会出现这种情况,接合后受体菌由于质粒对蔗糖的敏感性在15%蔗糖中是不长的或是很弱的,也就说双亲本杂交后总是能轻松筛选到转化子,这学期不知道怎么了,状况百出。到底是受体菌,还是重组 ...

那你就先验证下受体菌对不对,如果是对的那就把蔗糖浓度提高到20%或25%
6楼2015-04-21 19:28:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星乐之梦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 王丹2013 at 2015-04-21 19:28:12
那你就先验证下受体菌对不对,如果是对的那就把蔗糖浓度提高到20%或25%...

好吧,我试一下,但愿受体菌最后不会产生因为蔗糖浓度过高而被物理性的”压“死了的假象。
7楼2015-04-22 10:25:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanbiyun85

新虫 (正式写手)

我是新手,最近有准备在做敲除,是一个双核食用菌,能否发点敲除的资料供参考,谢谢
8楼2015-04-24 09:05:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星乐之梦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yanbiyun85 at 2015-04-24 09:05:16
我是新手,最近有准备在做敲除,是一个双核食用菌,能否发点敲除的资料供参考,谢谢

你可以参考下这篇文献,希望对你有帮助。

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 基因敲除技术及其应用.pdf
  • 2015-04-24 16:22:58, 378.59 K
9楼2015-04-24 16:23:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 星乐之梦 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 一志愿070300浙大化学358分,求调剂! +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 310求调剂 +4 baibai1314 2026-03-16 4/200 2026-03-22 20:19 by edmund7
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 265求调剂 +3 Jack?k?y 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:17 by JourneyLucky
[考研] 299求调剂 +6 △小透明* 2026-03-17 6/300 2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大,求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国海洋大学,生物学,301分,求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
信息提示
请填处理意见