应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母的醋酸锂转化法以及基因敲除
81/1返回列表
查看: 3928  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)

[交流] 酵母的醋酸锂转化法以及基因敲除

用醋酸锂法进行酵母的转化，因为转化的是线性片段，似乎难度很大，转化了3次都没有得到转化子，我是参照文献High-efficiency yeast transformation using the LiAc SS carrier DNA PEG method来操作的。
想问问各位做过这个转化的兄弟姐妹，你们当时做这个转化的时候有什么地方要特别注意的么？关于酵母的OD值我一直存在一点疑惑，是要培养到OD600等于2.0么？那样的话菌岂不是很老了？


还有就是，敲除真心很难，我是用融合片段直接导入（因为融合片段一直连接不上载体），也有看到过文献上有直接导入成功的，但是我做起来就特别费劲，是不是片段的浓度还不够高呢？我的片段浓度有98ng/ul，转化时用了20ul，是不是这个量还不够高呢？

最后，想某位学长学姐说过的，实验有时候真的很邪门，说不明白的事儿太多了，希望好心人多和我探讨探讨，谢谢~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-11-26 23:12:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jincongcong

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我不知道你做的是什么酵母，我们光滑OD一般在1.2-1.5.我也是基因片段转化，用的是电转化。片段浓度的话看来不是很高，我们的办法比较野蛮，都是讲片段PCR 很多管（3-6mL）然后苯酚氯仿抽提，用无菌水溶解到饱和，然后加10-20uL转化。你可以参考下。
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-14 12:13:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jincongcong at 2013-12-14 12:13:01
我不知道你做的是什么酵母，我们光滑OD一般在1.2-1.5.我也是基因片段转化，用的是电转化。片段浓度的话看来不是很高，我们的办法比较野蛮，都是讲片段PCR 很多管（3-6mL）然后苯酚氯仿抽提，用无菌水溶解到饱和，然 ...

谢谢
回复此楼
3楼2013-12-17 11:08:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主现在实验怎么样了？
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-20 10:58:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-02-20 10:58:09
楼主现在实验怎么样了？

现在用电转化，转世转进去了，可就是得到的都是假阳性
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-26 22:14:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzz19880205

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你现在应该毕业了吧 做的怎么样啊 我现在也是在做这类实验 难做
赞一下 回复此楼
6楼2015-08-27 17:56:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tsingavin

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
问一下，醋酸锂的方法可以转完整的质粒进去吗？？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2015-09-01 23:47:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

～微～

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
求给小妹说一下你们的解决方法，。多谢啦

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-05-18 00:09:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 猫di阁楼 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 8/400 2026-08-02 18:24 by ca3DVAx4OB19
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 9/450 2026-08-02 18:23 by ca3DVAx4OB19
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 10/500 2026-08-02 18:18 by ca3DVAx4OB19
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 12/600 2026-08-02 18:14 by ca3DVAx4OB19
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 16/800 2026-08-02 18:12 by ca3DVAx4OB19
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 14/700 2026-08-02 18:11 by ca3DVAx4OB19
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 16/800 2026-08-02 18:11 by ca3DVAx4OB19
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 20/1000 2026-08-02 18:04 by ca3DVAx4OB19
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 20/1000 2026-08-02 18:04 by ca3DVAx4OB19
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 20/1000 2026-08-02 18:03 by ca3DVAx4OB19
[基金申请] 准备明年的基金了 +7 Tide man 2026-07-27 7/350 2026-08-02 16:43 by gltch
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 9/450 2026-08-02 16:32 by jHcrHMhbKCFV
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +18 低垂的野花 2026-07-31 24/1200 2026-08-02 16:03 by swallowwh
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +9 archvillain 2026-08-02 11/550 2026-08-02 15:44 by alexon
[找工作] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 12/600 2026-08-02 13:43 by jHcrHMhbKCFV
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +15 布布和一二 2026-07-30 21/1050 2026-08-02 10:56 by iaeyuan
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 7/350 2026-08-02 07:59 by 88817753
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 18/900 2026-07-31 18:35 by lzchaihuo
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭