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猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 酵母的醋酸锂转化法以及基因敲除

用醋酸锂法进行酵母的转化，因为转化的是线性片段，似乎难度很大，转化了3次都没有得到转化子，我是参照文献High-efficiency yeast transformation using the LiAc SS carrier DNA PEG method来操作的。
想问问各位做过这个转化的兄弟姐妹，你们当时做这个转化的时候有什么地方要特别注意的么？关于酵母的OD值我一直存在一点疑惑，是要培养到OD600等于2.0么？那样的话菌岂不是很老了？

还有就是，敲除真心很难，我是用融合片段直接导入（因为融合片段一直连接不上载体），也有看到过文献上有直接导入成功的，但是我做起来就特别费劲，是不是片段的浓度还不够高呢？我的片段浓度有98ng/ul，转化时用了20ul，是不是这个量还不够高呢？

最后，想某位学长学姐说过的，实验有时候真的很邪门，说不明白的事儿太多了，希望好心人多和我探讨探讨，谢谢~

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1楼2013-11-26 23:12:17

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jincongcong

新虫 (初入文坛)

应助: 3 (幼儿园)
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★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

我不知道你做的是什么酵母，我们光滑OD一般在1.2-1.5.我也是基因片段转化，用的是电转化。片段浓度的话看来不是很高，我们的办法比较野蛮，都是讲片段PCR 很多管（3-6mL）然后苯酚氯仿抽提，用无菌水溶解到饱和，然后加10-20uL转化。你可以参考下。

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2楼2013-12-14 12:13:01

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猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by jincongcong at 2013-12-14 12:13:01
我不知道你做的是什么酵母，我们光滑OD一般在1.2-1.5.我也是基因片段转化，用的是电转化。片段浓度的话看来不是很高，我们的办法比较野蛮，都是讲片段PCR 很多管（3-6mL）然后苯酚氯仿抽提，用无菌水溶解到饱和，然 ...

谢谢

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3楼2013-12-17 11:08:37

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