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[交流]
酵母的醋酸锂转化法以及基因敲除
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用醋酸锂法进行酵母的转化，因为转化的是线性片段，似乎难度很大，转化了3次都没有得到转化子，我是参照文献High-efficiency yeast transformation using the LiAc SS carrier DNA PEG method来操作的。 想问问各位做过这个转化的兄弟姐妹，你们当时做这个转化的时候有什么地方要特别注意的么？关于酵母的OD值我一直存在一点疑惑，是要培养到OD600等于2.0么？那样的话菌岂不是很老了？ 还有就是，敲除真心很难，我是用融合片段直接导入（因为融合片段一直连接不上载体），也有看到过文献上有直接导入成功的，但是我做起来就特别费劲，是不是片段的浓度还不够高呢？我的片段浓度有98ng/ul，转化时用了20ul，是不是这个量还不够高呢？ 最后，想某位学长学姐说过的，实验有时候真的很邪门，说不明白的事儿太多了，希望好心人多和我探讨探讨，谢谢~ |
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