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猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)


[交流] 酵母的醋酸锂转化法以及基因敲除

用醋酸锂法进行酵母的转化,因为转化的是线性片段,似乎难度很大,转化了3次都没有得到转化子,我是参照文献High-efficiency yeast transformation using the LiAc SS carrier DNA PEG method来操作的。
想问问各位做过这个转化的兄弟姐妹,你们当时做这个转化的时候有什么地方要特别注意的么?关于酵母的OD值我一直存在一点疑惑,是要培养到OD600等于2.0么?那样的话菌岂不是很老了?


还有就是,敲除真心很难,我是用融合片段直接导入(因为融合片段一直连接不上载体),也有看到过文献上有直接导入成功的,但是我做起来就特别费劲,是不是片段的浓度还不够高呢?我的片段浓度有98ng/ul,转化时用了20ul,是不是这个量还不够高呢?

最后,想某位学长学姐说过的,实验有时候真的很邪门,说不明白的事儿太多了,希望好心人多和我探讨探讨,谢谢~
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Tsingavin

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
问一下,醋酸锂的方法可以转完整的质粒进去吗??

发自小木虫Android客户端
7楼2015-09-01 23:47:55
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jincongcong

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我不知道你做的是什么酵母,我们光滑OD一般在1.2-1.5.我也是基因片段转化,用的是电转化。片段浓度的话看来不是很高,我们的办法比较野蛮,都是讲片段PCR 很多管(3-6mL)然后苯酚氯仿抽提,用无菌水溶解到饱和,然后加10-20uL转化。你可以参考下。
2楼2013-12-14 12:13:01
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猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by jincongcong at 2013-12-14 12:13:01
我不知道你做的是什么酵母,我们光滑OD一般在1.2-1.5.我也是基因片段转化,用的是电转化。片段浓度的话看来不是很高,我们的办法比较野蛮,都是讲片段PCR 很多管(3-6mL)然后苯酚氯仿抽提,用无菌水溶解到饱和,然 ...

谢谢
3楼2013-12-17 11:08:37
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三蛰

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主现在实验怎么样了?
4楼2014-02-20 10:58:09
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