应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母的醋酸锂转化法以及基因敲除
51/1返回列表
查看: 3581  |  回复: 7
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)

[交流] 酵母的醋酸锂转化法以及基因敲除

用醋酸锂法进行酵母的转化，因为转化的是线性片段，似乎难度很大，转化了3次都没有得到转化子，我是参照文献High-efficiency yeast transformation using the LiAc SS carrier DNA PEG method来操作的。
想问问各位做过这个转化的兄弟姐妹，你们当时做这个转化的时候有什么地方要特别注意的么？关于酵母的OD值我一直存在一点疑惑，是要培养到OD600等于2.0么？那样的话菌岂不是很老了？


还有就是，敲除真心很难，我是用融合片段直接导入（因为融合片段一直连接不上载体），也有看到过文献上有直接导入成功的，但是我做起来就特别费劲，是不是片段的浓度还不够高呢？我的片段浓度有98ng/ul，转化时用了20ul，是不是这个量还不够高呢？

最后，想某位学长学姐说过的，实验有时候真的很邪门，说不明白的事儿太多了，希望好心人多和我探讨探讨，谢谢~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2013-11-26 23:12:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-02-20 10:58:09
楼主现在实验怎么样了？

现在用电转化，转世转进去了，可就是得到的都是假阳性
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-26 22:14:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

jincongcong

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我不知道你做的是什么酵母，我们光滑OD一般在1.2-1.5.我也是基因片段转化，用的是电转化。片段浓度的话看来不是很高，我们的办法比较野蛮，都是讲片段PCR 很多管（3-6mL）然后苯酚氯仿抽提，用无菌水溶解到饱和，然后加10-20uL转化。你可以参考下。
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-14 12:13:01
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jincongcong at 2013-12-14 12:13:01
我不知道你做的是什么酵母，我们光滑OD一般在1.2-1.5.我也是基因片段转化，用的是电转化。片段浓度的话看来不是很高，我们的办法比较野蛮，都是讲片段PCR 很多管（3-6mL）然后苯酚氯仿抽提，用无菌水溶解到饱和，然 ...

谢谢
回复此楼
3楼2013-12-17 11:08:37
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主现在实验怎么样了？
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-20 10:58:09
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭