| 查看: 2468 | 回复: 20 | |||
星空0961新虫 (小有名气)
|
[交流]
学术交流， 有关目的片段与载体连接 转化 遇到问题，急需帮助，谢谢！
|
| 本人从2000bp的T载体和自己所需的8000bp载体上通过Kpn1和BamH1分别酶切后得到我的300bp目的基因和7700kbp载体，第一次酶切后纯化回收后进行的第二次酶切，第二次酶切后直接跑胶，然后把所要的片段切胶回收，然后再做连接转化到DH5α，挑单菌落培养后PCR验证，得出结果，但是提取质粒发现，转化后的质粒条带与前面的T载体含有的目的片段的质粒条带相符，大约在2000bp出现，跟8000bp差很远。 切胶回收时切片段没问题，同时又将电泳液擦拭了（还是有点湿润），转化过程中怎么又出现T载体了呢！！！！我做了半个月的转化，都出现了这样的问题，急需朋友们的帮助，谢谢！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有169人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 目的片段连T载体后 测序正确 但双酶切感觉不大对
已经有4人回复
- 目的片段一端是粘性末端,一端是平末端与相应载体的连接如何提高效率?急!
已经有32人回复
- 关于目的基因与载体连接后转化感受态细胞提取质粒的问题。
已经有8人回复
- 大片段连接大载体难以连接的问题
已经有20人回复
- pMD-19T载体与目的片段的连接问题
已经有34人回复
- 目的片段与表达载体怎么都连接不上
已经有16人回复
- 目的片段载体片段连接不长菌
已经有19人回复
- 急求！大容量载体与片段连接问题
已经有5人回复
- PCR片段连接载体，转化不出阳性克隆，求解?
已经有14人回复
- 片段连接到载体后，总在酶切位点处发生缺失
已经有5人回复
- 目的片段和载体连接一直不上
已经有24人回复
- 目的基因与载体连接问题
已经有8人回复
- 什么方法确定插入目的片段后表达载体的阅读框有无发生变化？
已经有9人回复
- 载体酶切位点与目的片段重复
已经有13人回复
- 目的片段和T载体连接后PCR条带诡异
已经有16人回复
- 确定连接时载体，片段的加入量
已经有4人回复
- 载体和酶切片段连接的问题
已经有5人回复
- 目的片段与载体连接后无法检测出
已经有7人回复
- 目的片段与表达载体的连接
已经有23人回复
- 【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？
已经有20人回复
星空0961
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 809.5
- 散金: 104
- 帖子: 55
- 在线: 64.3小时
- 虫号: 2807687
- 注册: 2013-11-17
- 性别: GG
- 专业: 疫苗学
2楼2015-04-19 15:32:23
★
星空0961(金币+1): 谢谢参与
星空0961(金币+1): 谢谢参与
| 祝福 |
3楼2015-04-19 15:57:36
★
星空0961(金币+1): 谢谢参与
星空0961(金币+1): 谢谢参与
 |
4楼2015-04-19 15:57:44
★
星空0961(金币+1): 谢谢参与
星空0961(金币+1): 谢谢参与
 |
5楼2015-04-19 15:57:51
★
星空0961(金币+1): 谢谢参与
星空0961(金币+1): 谢谢参与
 |
6楼2015-04-19 16:02:29
|
|
7楼2015-04-19 16:18:56
lucklizhen
新虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 341
- 散金: 371
- 红花: 8
- 帖子: 383
- 在线: 182.6小时
- 虫号: 1437468
- 注册: 2011-10-11
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
8楼2015-04-19 20:48:37
9楼2015-04-20 19:58:27
|
|
10楼2015-04-20 20:26:13
10