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星空0961新虫 (小有名气)
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[交流]
学术交流， 有关目的片段与载体连接 转化 遇到问题，急需帮助，谢谢！
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| 本人从2000bp的T载体和自己所需的8000bp载体上通过Kpn1和BamH1分别酶切后得到我的300bp目的基因和7700kbp载体，第一次酶切后纯化回收后进行的第二次酶切，第二次酶切后直接跑胶，然后把所要的片段切胶回收，然后再做连接转化到DH5α，挑单菌落培养后PCR验证，得出结果，但是提取质粒发现，转化后的质粒条带与前面的T载体含有的目的片段的质粒条带相符，大约在2000bp出现，跟8000bp差很远。 切胶回收时切片段没问题，同时又将电泳液擦拭了（还是有点湿润），转化过程中怎么又出现T载体了呢！！！！我做了半个月的转化，都出现了这样的问题，急需朋友们的帮助，谢谢！！ |
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7楼2015-04-19 16:18:56