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XiaoZ-Xu

新虫 (初入文坛)

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专业: 动物遗传学

[求助] 空白对照怎么都有条带已有1人参与

空白组有条带，条带和目的条带一样，且较亮，产物436bp。
重新设计了引物、换了DEPC、mix，枪用酒精擦了无数次，枪头是一次性的，每次空白对照都单独加，跑胶的时候胶倒得比较厚，装好TBE后拿出来点样，且隔其他孔几个胶孔。
做完T克隆，菌液PCR产物测序结果是自己要的，但菌液就不是。另外，基因组上只有一个版本的序列是我要的，其他版本的显示的是大概那个位置的地方序列有NNNN，即没测出来的。
后面着急，抱着侥幸心理强做实验，T克隆后，双酶切能且出长度和目的条带相同的条带，测序结果却不是。
已经耗了一个月了，连起码的PCR都没解决，快疯了，求大神指点。

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1楼 2015-04-16 19:42:46

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muyouleya

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【答案】应助回帖

说实话，没大看明白问题。推测性回答：1.空白跑出带、菌液PCR产物和菌液测序结果均显示污染，但400多bp污染不常见。2.T克隆双酶切正常，但测序不对，可以看一下插入的片段是否包含两个酶切位点，Blast一下片段是哪的，然后根据实验室情况分析污染问题。

2楼2015-04-20 19:03:54

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