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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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XiaoZ-Xu

新虫 (初入文坛)

[求助] 空白对照怎么都有条带已有1人参与

空白组有条带,条带和目的条带一样,且较亮,产物436bp。
重新设计了引物、换了DEPC、mix,枪用酒精擦了无数次,枪头是一次性的,每次空白对照都单独加,跑胶的时候胶倒得比较厚,装好TBE后拿出来点样,且隔其他孔几个胶孔。
做完T克隆,菌液PCR产物测序结果是自己要的,但菌液就不是。另外,基因组上只有一个版本的序列是我要的,其他版本的显示的是大概那个位置的地方序列有NNNN,即没测出来的。
后面着急,抱着侥幸心理强做实验,T克隆后,双酶切能且出长度和目的条带相同的条带,测序结果却不是。
已经耗了一个月了,连起码的PCR都没解决,快疯了,求大神指点。
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muyouleya

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

说实话,没大看明白问题。推测性回答:1.空白跑出带、菌液PCR产物和菌液测序结果均显示污染,但400多bp污染不常见。2.T克隆双酶切正常,但测序不对,可以看一下插入的片段是否包含两个酶切位点,Blast一下片段是哪的,然后根据实验室情况分析污染问题。
2楼2015-04-20 19:03:54
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