应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 紧急求教高效液相色谱梯度洗脱方法问题！
171/2返回列表12下一页
查看: 1592  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

LiuMengTan

金虫 (小有名气)

[求助] 紧急求教高效液相色谱梯度洗脱方法问题！

请教一个HPLC的梯度洗脱问题：缓冲盐是20mmol/L的醋酸铵-醋酸缓冲盐溶液，pH=4.90。
原来的方法
0 min  100% 醋酸铵缓冲盐
2.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐
10 min 36% 甲醇  64% 醋酸铵缓冲盐
12.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐
15 min 100% 醋酸铵缓冲盐
原来可以检测出五种物质，出峰时间分别是2.33 2.67 5.46 6.45 10.88 min
但是现在我只想检测两种物质（2.67 和5.46两个峰）～
请教一下梯度洗脱的方法应该怎么修改呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-14 16:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
算一下那个峰结束的时候比例大概是多少，梯度走到那个比例就可以了。
赞一下(1人) 回复此楼
雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
2楼2015-04-14 16:33:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
10楼: Originally posted by LiuMengTan at 2015-04-14 17:34:11
就是你之前提到的重现性这个，我想等度的话应该不存在这个问题的对吧？
我梯度方法里面有机相最大到36%，那我这个等度时候是不是最多需要试到36%，甚至是你之前提到的计算后的24%左右呢？其实归根结底我只是想缩短 ...

等度洗脱信噪比几乎都会下降。至于试到多少根据实验结果决定就可以了。
赞一下(1人) 回复此楼
雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
14楼2015-04-14 17:45:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

LiuMengTan

金虫 (小有名气)
我这样试过。。不过这样的话是应该直接在那个比例时方法就结束还是应该接着加两三分钟的平衡到100%缓冲盐的时间？我其实想换成等度洗脱这样最好了～

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2015-04-14 16:49:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by LiuMengTan at 2015-04-14 16:49:16
我这样试过。。不过这样的话是应该直接在那个比例时方法就结束还是应该接着加两三分钟的平衡到100%缓冲盐的时间？我其实想换成等度洗脱这样最好了～

当然要平衡，否则每针之间无法保证重现性。
赞一下 回复此楼
雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
4楼2015-04-14 16:53:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LiuMengTan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by archbishop at 2015-04-14 16:53:44
当然要平衡，否则每针之间无法保证重现性。...

好吧～明白了，只是我想知道如果要改成等度洗脱的话应该如何修改呢？有没有什么比较好的方法可以尝试得到各流动相比例？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2015-04-14 16:57:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by LiuMengTan at 2015-04-14 16:57:33
好吧～明白了，只是我想知道如果要改成等度洗脱的话应该如何修改呢？有没有什么比较好的方法可以尝试得到各流动相比例？
...

梯度改等度没有可以参考的模式，你只能试。等度洗脱分离度、信噪比等不如梯度洗脱，不建议你改成等度。
你用的是什么柱子，为什么用100%的缓冲溶液？
赞一下 回复此楼
雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
6楼2015-04-14 17:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LiuMengTan

金虫 (小有名气)
安捷伦ZORBAX SB-AQ

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
7楼2015-04-14 17:07:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LiuMengTan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by archbishop at 2015-04-14 17:00:30
梯度改等度没有可以参考的模式，你只能试。等度洗脱分离度、信噪比等不如梯度洗脱，不建议你改成等度。
你用的是什么柱子，为什么用100%的缓冲溶液？...

改成等度洗脱的话得到的信号值会低很多吗？我刚试了下，出峰快了，前面几分钟就出来了，但是貌似峰面积比较之前梯度而言要小了，还得继续适～
如果用等度的话，可不可以推荐几个比例依次尝试呢？需不需要考虑前后的稳定问题？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2015-04-14 17:12:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
8楼: Originally posted by LiuMengTan at 2015-04-14 17:12:30
改成等度洗脱的话得到的信号值会低很多吗？我刚试了下，出峰快了，前面几分钟就出来了，但是貌似峰面积比较之前梯度而言要小了，还得继续适～
如果用等度的话，可不可以推荐几个比例依次尝试呢？需不需要考虑前后 ...

先粗调再细调。从90%开始，每隔10%设一个比例，一直到10%，再缩小范围，每隔5%、3%。
前后稳定性问题是指什么？
赞一下 回复此楼
雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
9楼2015-04-14 17:24:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LiuMengTan

金虫 (小有名气)
就是你之前提到的重现性这个，我想等度的话应该不存在这个问题的对吧？
我梯度方法里面有机相最大到36%，那我这个等度时候是不是最多需要试到36%，甚至是你之前提到的计算后的24%左右呢？其实归根结底我只是想缩短点样品分析时，并且尽可能不过大影响其出峰强度。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
10楼2015-04-14 17:34:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 LiuMengTan 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 13/650 2026-03-02 07:27 by 好好好1233
[考研] 0854复试调剂 276 +4 wmm9 2026-03-01 5/250 2026-03-02 06:41 by 汪！？！
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭