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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 求助，高效液相色谱
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坐标系石头忆

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助，高效液相色谱

我在做高效液相色谱的时候俩个峰连在一块，没法分离，我取得流动相是乙腈和水，改变水的比例从20：80，到40:60，都分离不出来，柱温选的30摄氏度，流速是0.8，请问一下有什么办法进行分离，求各位指教
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去留随意，请记住自己想要成为的样子，看更广阔的世界，藏远方与梦想于心
1楼 2013-04-23 11:53:02
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swallow13

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2013-04-23 12:06:10
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坐标系石头忆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by swallow13 at 2013-04-23 12:06:10
lz应该附个图上来看看 一般来讲 分不开有几个方面的原因：1. 色谱柱不适宜 2.梯度条件不适宜 3.流动相不适宜

我改变了流动相为甲醇和水时，更加洗不出来了，那如果改变柱温的话是升高柱温有利于分离还是降低柱温有利于分离啊
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去留随意，请记住自己想要成为的样子，看更广阔的世界，藏远方与梦想于心
3楼2013-04-23 12:14:54
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swallow13

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2013-04-23 12:26:54
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ruomeng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
低温出峰速度慢，低温有助于分离，不过３０℃再降估计意义不大，可以考虑将水相改为缓冲盐，根据样品的Ｐｋａ调节下ｐＨ……
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好好学习，天天向上
5楼2013-04-23 13:10:26
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坐标系石头忆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ruomeng at 2013-04-23 13:10:26
低温出峰速度慢，低温有助于分离，不过３０℃再降估计意义不大，可以考虑将水相改为缓冲盐，根据样品的Ｐｋａ调节下ｐＨ……

嗯，我用的加了0.1%的磷酸溶液，但是效果还是不是很理想
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6楼2013-04-23 13:43:57
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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6楼: Originally posted by 坐标系石头忆 at 2013-04-23 13:43:57
嗯，我用的加了0.1%的磷酸溶液，但是效果还是不是很理想...

流动相中加什么要看物质的结构，到现在都没说出结构信息，都是空谈
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7楼2013-04-23 14:14:04
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坐标系石头忆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by liu2011 at 2013-04-23 14:14:04
流动相中加什么要看物质的结构，到现在都没说出结构信息，都是空谈...

我是漆酶降解多环芳烃芘，在降解12个小时后测芘的浓度变化，下面是可能的反应方程式图，产物的结构和芘的比较相似，所以后面那个产物峰基本上就和反应物峰连在一起的。。。

未命名.jpg



上面为加入酶的峰，下面为没有加酶的峰.jpg
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8楼2013-04-23 14:52:47
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cxhjm

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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先不考虑梯度洗脱，用酸性缓冲溶液(先考察pH),流速降低，
你看看色谱柱是否合适诶
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9楼2013-04-23 15:16:11
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ruomeng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 坐标系石头忆 at 2013-04-23 13:43:57
嗯，我用的加了0.1%的磷酸溶液，但是效果还是不是很理想...

考虑下铵盐（醋酸铵）或者钠盐/钾盐，用醋酸或者相应的酸调节pH稍小于pKa，再调节梯度试试。没有可以参考的文献吗
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好好学习，天天向上
10楼2013-04-23 18:28:19
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