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笑了乐

新虫 (小有名气)

[求助] 求助高效液相色谱全波长扫描的问题

我做高效液相,不知道波长,就做了个全波长扫描,检测器是2998PDA,流动相是乙腈和水,梯度洗脱,自动进样,我的药品较少,只有0.5ml,结果出的峰很小,是我的样品太少的原因啊,还是,我的洗脱相有问题,没有洗脱下来?希望懂得人帮我
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wddmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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豆哥(金币+1): 谢谢参与 2012-03-08 08:35:11
其实你可以把梯度最后有机相大的比例提高一点,时间维持长一些,看有没有峰出来,来断定是不是没洗脱出来;另外你的主成分浓度多少?出来的那个峰最大吸收是多少?你是不是选的波长不合适?一项一项的分析
1234
2楼2012-03-07 10:46:09
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笑了乐

新虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by wddmq at 2012-03-07 10:46:09:
其实你可以把梯度最后有机相大的比例提高一点,时间维持长一些,看有没有峰出来,来断定是不是没洗脱出来;另外你的主成分浓度多少?出来的那个峰最大吸收是多少?你是不是选的波长不合适?一项一项的分析

我的是乙醇提取物,想通过HPLC看看有几种化合物
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3楼2012-03-07 10:50:05
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lgmzc818

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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笑了乐: 金币+20 2012-08-10 09:31:09
其实你可以把梯度最后有机相大的比例提高一点,时间维持长一些,看有没有峰出来,来断定是不是没洗脱出来;另外你的主成分浓度多少?出来的那个峰最大吸收是多少?你是不是选的波长不合适?一项一项的分析
4楼2012-03-07 11:00:52
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wddmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

就提了0.5mL?浓缩的?还是柱子洗脱出来的部分?你点板了么?按说内容物应该比较丰富才是。也有可能你提的东西里有些组分紫外吸收较弱或没什么吸收。
1234
5楼2012-03-07 11:01:43
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gaoxuewang

至尊木虫 (著名写手)

小木虫的朋友

【答案】应助回帖

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首先,要搞清楚hplc的出峰原理,检测器之所以能够出峰,是因为某一物种在该波长处有吸收,而且该物质在某一波长处吸收越强,出峰越明显,因此你首先要做的是对你的化合物做一个“紫外-可见”吸收光谱,确定化合物的最大吸收波长位置,然后将最大吸收波长设为检测波长进行检测

其次,混合物的分离和液相色谱的柱子也有关系,看你使用的是正相还是反相,结合柱子以及流动相的极性,确认如何能将所有的物种洗脱下来,当然,如果使用TCL点板能显色(或者碘熏,或者其它显色剂)的话也能大概确定里面有几个化合物种类
[url=http://www.91cool.net/][img]http://ip.91cool.net/img/zbc.gif[/img][/url]
6楼2012-03-07 14:39:05
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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我在想一个问题,你所要的成分在紫外检测器的波长范围内有没有吸收,一般紫外检测器都有一个波长范围的,如果你想要的成分没有吸收的话,是不是那个小峰也是没有用的啊。
7楼2012-03-07 19:24:12
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你确定你的主峰出来了没有呀?把有机相给调大些吧
8楼2012-06-07 13:26:17
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