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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 求助高效液相色谱全波长扫描的问题
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笑了乐

新虫 (小有名气)

[求助] 求助高效液相色谱全波长扫描的问题

我做高效液相，不知道波长，就做了个全波长扫描，检测器是2998PDA,流动相是乙腈和水，梯度洗脱，自动进样，我的药品较少，只有0.5ml，结果出的峰很小，是我的样品太少的原因啊，还是，我的洗脱相有问题，没有洗脱下来？希望懂得人帮我
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1楼 2012-03-07 10:35:06
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gaoxuewang

至尊木虫 (著名写手)

小木虫的朋友

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先，要搞清楚hplc的出峰原理，检测器之所以能够出峰，是因为某一物种在该波长处有吸收，而且该物质在某一波长处吸收越强，出峰越明显，因此你首先要做的是对你的化合物做一个“紫外-可见”吸收光谱，确定化合物的最大吸收波长位置，然后将最大吸收波长设为检测波长进行检测

其次，混合物的分离和液相色谱的柱子也有关系，看你使用的是正相还是反相，结合柱子以及流动相的极性，确认如何能将所有的物种洗脱下来，当然，如果使用TCL点板能显色（或者碘熏，或者其它显色剂）的话也能大概确定里面有几个化合物种类
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6楼2012-03-07 14:39:05
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wddmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥(金币+1): 谢谢参与 2012-03-08 08:35:11
其实你可以把梯度最后有机相大的比例提高一点，时间维持长一些，看有没有峰出来，来断定是不是没洗脱出来；另外你的主成分浓度多少？出来的那个峰最大吸收是多少？你是不是选的波长不合适？一项一项的分析
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1234
2楼2012-03-07 10:46:09
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笑了乐

新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by wddmq at 2012-03-07 10:46:09:
其实你可以把梯度最后有机相大的比例提高一点，时间维持长一些，看有没有峰出来，来断定是不是没洗脱出来；另外你的主成分浓度多少？出来的那个峰最大吸收是多少？你是不是选的波长不合适？一项一项的分析

我的是乙醇提取物，想通过HPLC看看有几种化合物
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3楼2012-03-07 10:50:05
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lgmzc818

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
笑了乐: 金币+20 2012-08-10 09:31:09
其实你可以把梯度最后有机相大的比例提高一点，时间维持长一些，看有没有峰出来，来断定是不是没洗脱出来；另外你的主成分浓度多少？出来的那个峰最大吸收是多少？你是不是选的波长不合适？一项一项的分析
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4楼2012-03-07 11:00:52
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