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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 紧急求教高效液相色谱梯度洗脱方法问题！
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LiuMengTan

金虫 (小有名气)

[求助] 紧急求教高效液相色谱梯度洗脱方法问题！

请教一个HPLC的梯度洗脱问题：缓冲盐是20mmol/L的醋酸铵-醋酸缓冲盐溶液，pH=4.90。
原来的方法
0 min  100% 醋酸铵缓冲盐
2.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐
10 min 36% 甲醇  64% 醋酸铵缓冲盐
12.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐
15 min 100% 醋酸铵缓冲盐
原来可以检测出五种物质，出峰时间分别是2.33 2.67 5.46 6.45 10.88 min
但是现在我只想检测两种物质（2.67 和5.46两个峰）～
请教一下梯度洗脱的方法应该怎么修改呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-04-14 16:26:16
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LiuMengTan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by archbishop at 2015-04-14 17:00:30
梯度改等度没有可以参考的模式，你只能试。等度洗脱分离度、信噪比等不如梯度洗脱，不建议你改成等度。
你用的是什么柱子，为什么用100%的缓冲溶液？...

改成等度洗脱的话得到的信号值会低很多吗？我刚试了下，出峰快了，前面几分钟就出来了，但是貌似峰面积比较之前梯度而言要小了，还得继续适～
如果用等度的话，可不可以推荐几个比例依次尝试呢？需不需要考虑前后的稳定问题？

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8楼2015-04-14 17:12:30
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
算一下那个峰结束的时候比例大概是多少，梯度走到那个比例就可以了。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
2楼2015-04-14 16:33:53
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LiuMengTan

金虫 (小有名气)
我这样试过。。不过这样的话是应该直接在那个比例时方法就结束还是应该接着加两三分钟的平衡到100%缓冲盐的时间？我其实想换成等度洗脱这样最好了～

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3楼2015-04-14 16:49:16
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by LiuMengTan at 2015-04-14 16:49:16
我这样试过。。不过这样的话是应该直接在那个比例时方法就结束还是应该接着加两三分钟的平衡到100%缓冲盐的时间？我其实想换成等度洗脱这样最好了～

当然要平衡，否则每针之间无法保证重现性。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
4楼2015-04-14 16:53:44
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