| 查看: 2979 | 回复: 6 | ||
[求助]
高效液相梯度洗脱耐用性试验怎么做？求各位大神指教
|
| 现在在做一个项目，流动相初始比例是盐：甲醇（50:50），但是峰根本分不开，后来重新摸索了一套方法，流动相比例设成梯度的，峰是分开了，可是耐用性试验流动相比例该怎么调，麻烦各位大神指教下，谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
晴川万里新书
已经有4人回复
-
在线求助，急！！！请问哪里可以做磁性纳米材料的高分辨透射电镜的测试表征呀？
已经有5人回复
-
药理学论文润色/翻译怎么收费?
已经有238人回复
-
福州大学李兴淑教授课题组急招博士研究生
已经有9人回复
-
Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Analysis of Small Interfering RNAs
已经有1人回复
-
加巴喷丁胶囊激素6月超限杂质结构
已经有4人回复
-
中药检测种决明子、枳实、水蛭、茯苓品种检测问题交流
已经有1人回复
-
看过往病历，有疑惑请教
已经有2人回复
-
天平合规性问题
已经有113人回复
-
跪求SIMCA14 安装包
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 梯度混合器如何实现线性梯度？？！！！
已经有8人回复
- 怎样用高效液相色谱来做5HMF的标准曲线
已经有12人回复
- 耐用性实验问题
已经有4人回复
- 求职高效液相色谱定时改变流动相比例（梯度洗脱）的问题
已经有3人回复
- 高效液相色谱梯度，基线往下走
已经有4人回复
- 位移梯度（displacement gradient）的概念和求法
已经有4人回复
- 高效液相反相梯度色谱中出现鬼峰的原因
已经有15人回复
- 液相色谱计量检定相关问题，比如梯度误差等！
已经有4人回复
- 【求助/交流】高效液相色谱 中 梯度变化曲线 是指什么？
已经有10人回复
- 【求助】液相色谱跑梯度时出现杂峰？
已经有24人回复
- 【讨论】什么才是梯度淋洗法
已经有3人回复
- 【求助】液相用乙腈做梯度出现密集上下波动峰
已经有8人回复
- 【讨论】高效液相色谱法梯度耐用性怎么做
已经有13人回复
- 【求助】请教：液相色谱梯度设计的问题
已经有6人回复
2楼2013-10-23 10:06:27
yi_wang
铁杆木虫 (著名写手)
roye
- 应助: 677 (博士)
- 金币: 9605.9
- 红花: 40
- 帖子: 1161
- 在线: 349.3小时
- 虫号: 959198
- 注册: 2010-03-01
- 性别: GG
- 专业: 药物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
高效液相色谱(HPLC)在药品检验中使用越来越普遍，尤其是在药品的含量测定和有关物质检查方面。随着低压四元梯度HPLC仪的出现，使流动相的调整优化更加方便、快捷，更容易实现仪器的自动化操作，因此逐渐成为高效液相色谱仪的主流配置，给使用者带来极大的便利。许多流动相中往往含有缓冲盐，当使用低压四元梯度高效液相色谱仪，仪器按设定比例，由比例阀控制相应比例混合后，进行洗脱时，如果流动相没有考察耐用性，有时可能会在阀后有盐析出，且在到达柱前仍没有溶解，这样极易损坏活塞杆及堵塞柱子。实验中，作者发现：盐酸雷诺嗪有关物质检查及含量测定使用HPI C法，流动相为0．68 磷酸二氢钠(用三乙胺调pH 至6．5±0．1)溶液一乙腈(50：50)，使用比例阀将缓冲液和乙腈分别泵送时，实验不能正常进行。经查，是因0．68 NaH。PO 缓冲盐浓度偏高，当阀后二相相遇时NaH：PO 便析出。为此做了以下试验：分别配制浓度为0．68 和0．1 0A磷酸二氢钠水溶液，并用三乙胺调pH至6．5±0．1；取具塞带刻度离心管，分别按乙腈一磷酸二氢钠(pH6．5± 0．1)溶液不同比例混合，观察溶液的澄清度，溶液在黑背景下观察，以蒸馏水为空白对照。结果如下表：从表中可以看到，两相相遇时，开始都出现浑浊；充分振摇后，有机相乙腈比例低的流动相可溶解至澄清，但当缓冲盐的浓度偏高，即使振摇，析出的盐也不可能完全溶解。另外，即使预先将两相混合振摇后溶液澄清，但若缓冲盐的浓度太高，如果使用低压梯度泵分别泵送，有可能出现流动相混浊现象，而此时又不能被发现，此溶液进入到柱子中，轻者色谱图会出现怪峰，实验无法正常进行，严重时会堵柱子。通过上述讨论，作者认为，在质量标准中建立HPLC方法时，应注意： 1．在优化流动相组成时，尽可能降低缓冲盐浓度。 2．不同的实验室，试验条件有所差异，且柱子牌号不同，可能需要调整质量标准中规定的流动相的比例(这在质量标准中是允许的)。因此建议在耐用性实验时，必须对缓冲盐浓度在一定范围内的变化对流动相澄清度的影响等色谱耐用性进行考察。 3．等度洗脱时，应预先将流动相混合好，并经脱气后再使用。 还有一篇关于“加强HPLC流动相的耐用性试验研究”的文章，你可以看看。 |
3楼2013-10-23 10:15:53
News
专家顾问 (职业作家)
- DRDEPI: 6
- 应助: 366 (硕士)
- 贵宾: 0.025
- 金币: 5936.5
- 散金: 3206
- 红花: 155
- 沙发: 24
- 帖子: 4829
- 在线: 677.6小时
- 虫号: 1205015
- 注册: 2011-02-17
- 性别: GG
- 专业: 色谱分析
- 管辖: 生物医药区
4楼2013-10-23 12:30:56
duliuhui
金虫 (正式写手)
- DRDEPI: 1
- 应助: 157 (高中生)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 1673.2
- 红花: 12
- 帖子: 362
- 在线: 110.3小时
- 虫号: 1849643
- 注册: 2012-06-06
- 专业: 色谱分析
5楼2013-10-23 16:18:54
星海慧儿
荣誉版主 (职业作家)
木虫精灵
- DRDEPI: 17
- 应助: 849 (博后)
- 贵宾: 0.978
- 金币: 22119.4
- 散金: 3714
- 红花: 103
- 沙发: 5
- 帖子: 3828
- 在线: 803.1小时
- 虫号: 568253
- 注册: 2008-06-03
- 专业: 分析化学
- 管辖: 新药研发
6楼2013-10-24 10:10:04
7楼2013-10-24 10:29:40
10