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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 紧急求教高效液相色谱梯度洗脱方法问题！
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LiuMengTan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by archbishop at 2015-04-14 17:24:04
先粗调再细调。从90%开始，每隔10%设一个比例，一直到10%，再缩小范围，每隔5%、3%。
前后稳定性问题是指什么？...

另外还有一个问题是因为之前所用的梯度洗脱方法中一直存在基线漂移问题，大概在5分钟时候开始基线慢慢开始向上走！所以想等度洗脱应该没有这个问题的，就想试试～

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11楼2015-04-14 17:36:20
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LiuMengTan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by LiuMengTan at 2015-04-14 17:36:20
另外还有一个问题是因为之前所用的梯度洗脱方法中一直存在基线漂移问题，大概在5分钟时候开始基线慢慢开始向上走！所以想等度洗脱应该没有这个问题的，就想试试～
...

按照之前的洗脱比例计算在7.5min时候有机相甲醇为24%左右，所以我调整的方法如下：
0min  100%醋酸铵缓冲盐
2.5min  100%醋酸铵缓冲盐
7.5min 24%有机相甲醇，76%醋酸铵缓冲盐
9min  100%醋酸铵缓冲盐
10min  100%醋酸铵缓冲盐
请问一下这样是否有问题？谢谢😜

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12楼2015-04-14 17:41:05
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
11楼: Originally posted by LiuMengTan at 2015-04-14 17:36:20
另外还有一个问题是因为之前所用的梯度洗脱方法中一直存在基线漂移问题，大概在5分钟时候开始基线慢慢开始向上走！所以想等度洗脱应该没有这个问题的，就想试试～
...

梯度洗脱流动相的比例在变，基线必然会升高或者下降。这是正常现象。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
13楼2015-04-14 17:42:04
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
10楼: Originally posted by LiuMengTan at 2015-04-14 17:34:11
就是你之前提到的重现性这个，我想等度的话应该不存在这个问题的对吧？
我梯度方法里面有机相最大到36%，那我这个等度时候是不是最多需要试到36%，甚至是你之前提到的计算后的24%左右呢？其实归根结底我只是想缩短 ...

等度洗脱信噪比几乎都会下降。至于试到多少根据实验结果决定就可以了。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
14楼2015-04-14 17:45:03
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LiuMengTan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by archbishop at 2015-04-14 17:45:03
等度洗脱信噪比几乎都会下降。至于试到多少根据实验结果决定就可以了。...

好的，那我继续试试吧！看来得去补补这方面的知识了，不然感觉很糊涂，没有目的性！谢谢耐心指导哈😄

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15楼2015-04-14 17:47:34
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
12楼: Originally posted by LiuMengTan at 2015-04-14 17:41:05
按照之前的洗脱比例计算在7.5min时候有机相甲醇为24%左右，所以我调整的方法如下：
0min  100%醋酸铵缓冲盐
2.5min  100%醋酸铵缓冲盐
7.5min 24%有机相甲醇，76%醋酸铵缓冲盐
9min  100%醋酸铵缓冲盐
10min  ...

之前是平衡2.5min，不知道你为什么缩短了。其他没有什么问题。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
16楼2015-04-14 17:48:05
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
15楼: Originally posted by LiuMengTan at 2015-04-14 17:47:34
好的，那我继续试试吧！看来得去补补这方面的知识了，不然感觉很糊涂，没有目的性！谢谢耐心指导哈😄
...

不谢。祝实验顺利。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
17楼2015-04-14 17:53:27
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