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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr扩增基因及测序相关问题的求助 急！！！
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张grape

铁虫 (初入文坛)

[求助] pcr扩增基因及测序相关问题的求助 急！！！ 已有2人参与

我正在扩增一个2808bp的基因 因为完整序列很难一次扩出 我就分了三段去扩 其中中间一段为2000多bp 扩出来后连接T载体 挑单克隆测序 一直测不出有
相同序列的单克隆 已经测了20多个 都有碱基的不一样 后来我采用提高退火温度 增加扩增特异性的方法去扩 还是没测出相同序列的 之后又换了taq酶 一开始用
la taq 后来用的pfu 也没测出来 一直有较多碱基不同，我在ncbi上查了一下 这个基因有3个transcript variant 不知道是否是这个原因，现在一筹莫展 希望
哪位大神帮我指点迷津 我将感激不尽！！！！！
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1楼 2015-04-13 19:39:11
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接序列合成。有一部分不一样也是合理的事呀。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-04-13 20:45:15
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张grape

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-04-13 20:45:15
直接序列合成。有一部分不一样也是合理的事呀。

是单克隆之间序列差异很大
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3楼2015-04-16 13:47:21
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781055707

木虫 (著名写手)
测序的在结果与目地基因得覆盖率有多少

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-04-16 15:06:55
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张grape

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 781055707 at 2015-04-16 15:06:55
测序的在结果与目地基因得覆盖率有多少

百分之九十多
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5楼2015-04-16 18:42:16
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看到你的测序结果和目的基因的重合率有这么高，我觉得还可以吧，毕竟测序的时候如果有连续的几个碱基一样，测序会出现一些状况的，还有就是你的模板刚好是有发生基因突变的可能 呵呵
赞一下(1人) 回复此楼
我要让你的生活因为有我而更精彩
6楼2015-04-16 19:08:25
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781055707

木虫 (著名写手)
不同人之间的内参都只有95。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
7楼2015-04-17 07:49:13
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