应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western内参的转膜问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 1912  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

nxyangbei

新虫 (初入文坛)

[求助] western内参的转膜问题 已有2人参与

western新手菜鸟一枚，做170kda蛋白，β-actin做内参，转膜200mA,2h,目的蛋白经过后面步骤处理后有条带，但是内参做了很多遍什么都没有。因为一抗二抗都是别人用过的，所以怀疑是转膜问题。请问43Kda蛋白200ma,2h，是转过了嘛？NC膜0.45um.
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-03-29 17:14:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nxyangbei

新虫 (初入文坛)
补充：胶考染后能看到内参条带
赞一下 回复此楼
2楼2015-03-29 17:16:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidong.0107

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是你转的时间有点长，不论是湿转还是干转都不需要这么久
赞一下 回复此楼
3楼2015-03-30 09:46:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nxyangbei

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lidong.0107 at 2015-03-30 09:46:43
可能是你转的时间有点长，不论是湿转还是干转都不需要这么久

谢谢，那我切开分开转试一下。可以一个夹子放目的蛋白的胶，一个夹子放内参的胶，转到一定时间停下来吧内参的那个三明治拿出来然后再继续转目的蛋白吗？转膜中间可以停吗？
赞一下 回复此楼
4楼2015-03-30 13:29:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海绵船长

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的膜孔径太大，换0.22的膜来做，就没问题了，时间也是合理的

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
5楼2015-03-30 14:44:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海绵船长

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by nxyangbei at 2015-03-30 13:29:33
谢谢，那我切开分开转试一下。可以一个夹子放目的蛋白的胶，一个夹子放内参的胶，转到一定时间停下来吧内参的那个三明治拿出来然后再继续转目的蛋白吗？转膜中间可以停吗？...

转膜最好中间不要停。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2015-03-30 14:44:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidong.0107

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by nxyangbei at 2015-03-30 13:29:33
谢谢，那我切开分开转试一下。可以一个夹子放目的蛋白的胶，一个夹子放内参的胶，转到一定时间停下来吧内参的那个三明治拿出来然后再继续转目的蛋白吗？转膜中间可以停吗？...

中间停一下我做过，没有问题，你得目的蛋白是多大的？因为.45的膜有点大，注意时间的控制
赞一下 回复此楼
7楼2015-03-30 15:54:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nxyangbei

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 海绵船长 at 2015-03-30 14:44:46
转膜最好中间不要停。
...

目的蛋白170Kda
回复此楼
8楼2015-04-01 14:53:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nxyangbei

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lidong.0107 at 2015-03-30 15:54:22
中间停一下我做过，没有问题，你得目的蛋白是多大的？因为.45的膜有点大，注意时间的控制...

我的目的蛋白有170Kda
赞一下 回复此楼
9楼2015-04-01 14:56:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nxyangbei

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 海绵船长 at 2015-03-30 14:44:46
转膜最好中间不要停。
...

谢谢啦
回复此楼
10楼2015-04-01 14:58:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nxyangbei 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕333求调剂 +10 北道巷 2026-03-24 10/500 2026-03-28 23:06 by 无际的草原
[考研] 332求调剂 +4 @MZB382400 2026-03-28 4/200 2026-03-28 21:02 by 唐沐儿
[考研] 一志愿北京工业大学，324分求调剂 +4 零八# 2026-03-28 4/200 2026-03-28 15:01 by 17865157980
[考研] 求调剂 +6 芦lty 2026-03-25 7/350 2026-03-28 13:13 by 唐沐儿
[考研] 328求调剂 +7 嗯滴的基本都 2026-03-27 7/350 2026-03-28 04:19 by fmesaito
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭