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duanruijing

金虫 (小有名气)

[求助] pcr目的条带不明显 已有1人参与

PCR之后,目的条带基本没有,是引物有问题还是什么原因?求高手指点。

pcr目的条带不明显
IMG_2179.JPG
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摆正心态,多多学习
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duanruijing

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kehope at 2015-03-26 23:31:59
能否说明下你用的cdna是怎么得到的?
目的蛋白序列,以及引物的序列信息。
你pcr的反应条件。
你上了这几个通道,每个通道是什么意思啊?marker又是怎么个顺序?250  500  750  1000  1500??
你想p出多大的条 ...

采用的CTAB法提取的DNA。我想做的是RAPD分析,引物都是通过看文献,选取多态性较好的再由引物公司设计的。RAPD-PCR扩增反应体系为20μL:2×Power Taq PCRMasterMix 9 μL,引物1μL,模板1μL,双蒸水补足到1μL。
PCR扩增程序:94℃预变性3min
      94℃变性1min        38℃退火45s
      72℃延伸1min        40个循环
      72℃延伸7min         4℃保存
引物的TM值一般是32℃,其实预想的结果是每个通道都能有多条清晰的条带。
摆正心态,多多学习
3楼2015-03-28 10:54:53
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查看全部 3 个回答

kehope

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-27 11:35:26
能否说明下你用的cdna是怎么得到的?
目的蛋白序列,以及引物的序列信息。
你pcr的反应条件。
你上了这几个通道,每个通道是什么意思啊?marker又是怎么个顺序?250  500  750  1000  1500??
你想p出多大的条带?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-03-26 23:31:59
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