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pcr目的条带不明显
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duanruijing
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pcr目的条带不明显
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PCR之后,目的条带基本没有,是引物有问题还是什么原因?求高手指点。
IMG_2179.JPG
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1楼
2015-03-26 18:44:22
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kehope
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【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流
2015-03-27 11:35:26
能否说明下你用的cdna是怎么得到的?
目的蛋白序列,以及引物的序列信息。
你pcr的反应条件。
你上了这几个通道,每个通道是什么意思啊?marker又是怎么个顺序?250 500 750 1000 1500??
你想p出多大的条带?
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2楼
2015-03-26 23:31:59
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引用回帖:
2楼
:
Originally posted by
kehope
at 2015-03-26 23:31:59
能否说明下你用的cdna是怎么得到的?
目的蛋白序列,以及引物的序列信息。
你pcr的反应条件。
你上了这几个通道,每个通道是什么意思啊?marker又是怎么个顺序?250 500 750 1000 1500??
你想p出多大的条 ...
采用的CTAB法提取的DNA。我想做的是RAPD分析,引物都是通过看文献,选取多态性较好的再由引物公司设计的。RAPD-PCR扩增反应体系为20μL:2×Power Taq PCRMasterMix 9 μL,引物1μL,模板1μL,双蒸水补足到1μL。
PCR扩增程序:94℃预变性3min
94℃变性1min 38℃退火45s
72℃延伸1min 40个循环
72℃延伸7min 4℃保存
引物的TM值一般是32℃,其实预想的结果是每个通道都能有多条清晰的条带。
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3楼
2015-03-28 10:54:53
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