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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr目的条带不明显
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duanruijing

金虫 (小有名气)

[求助] pcr目的条带不明显 已有1人参与

PCR之后，目的条带基本没有，是引物有问题还是什么原因？求高手指点。

pcr目的条带不明显
IMG_2179.JPG
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摆正心态，多多学习
1楼 2015-03-26 18:44:22
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kehope

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-27 11:35:26
能否说明下你用的cdna是怎么得到的？
目的蛋白序列，以及引物的序列信息。
你pcr的反应条件。
你上了这几个通道，每个通道是什么意思啊？marker又是怎么个顺序？250  500  750  1000  1500？？
你想p出多大的条带？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-03-26 23:31:59
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duanruijing

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kehope at 2015-03-26 23:31:59
能否说明下你用的cdna是怎么得到的？
目的蛋白序列，以及引物的序列信息。
你pcr的反应条件。
你上了这几个通道，每个通道是什么意思啊？marker又是怎么个顺序？250  500  750  1000  1500？？
你想p出多大的条 ...

采用的CTAB法提取的DNA。我想做的是RAPD分析，引物都是通过看文献，选取多态性较好的再由引物公司设计的。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增反应体系为２０μＬ：２×Ｐｏｗｅｒ　Ｔａｑ　ＰＣＲMasterMix 9 μＬ,引物1μL，模板1μL，双蒸水补足到1μL。
PCR扩增程序：94℃预变性3min
      94℃变性1min        38℃退火45s
      72℃延伸1min        40个循环
      72℃延伸7min         4℃保存
引物的TM值一般是32℃，其实预想的结果是每个通道都能有多条清晰的条带。
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摆正心态，多多学习
3楼2015-03-28 10:54:53
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