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快乐的小草

新虫 (初入文坛)

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[交流] Tail-PCR产物怎么就与质粒连接不上？

本人最近一直做Tail-PCR，用的是ExTaq。将第三轮产物割胶回收后，经验证应该是有目的条带的，但是最后连接转化后挑取的的转化子，发现都是没有插入目的片段，但是如果用16s rRNA的割胶回收片段最后转化子就是插入了目的片段。以为第三轮产物浓度低，就以第三轮割胶回收的产物为模板，用第三轮的产物再次扩增，没有目的条带，没办法，我们就一次多扩增几管，然后割胶回收，回收条带经检验是回收成功了，但是还是没有阳性转化子。已经做了三个月了，实在找不出原因，真的很崩溃，希望各位能够指点一下。

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1楼 2015-03-25 08:13:00

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