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快乐的小草

新虫 (初入文坛)

[交流] Tail-PCR产物怎么就与质粒连接不上?

本人最近一直做Tail-PCR,用的是ExTaq。将第三轮产物割胶回收后,经验证应该是有目的条带的,但是最后连接转化后挑取的的转化子,发现都是没有插入目的片段,但是如果用16s rRNA的割胶回收片段最后转化子就是插入了目的片段。以为第三轮产物浓度低,就以第三轮割胶回收的产物为模板,用第三轮的产物再次扩增,没有目的条带,没办法,我们就一次多扩增几管,然后割胶回收,回收条带经检验是回收成功了,但是还是没有阳性转化子。已经做了三个月了,实在找不出原因,真的很崩溃,希望各位能够指点一下。
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