24小时热门版块排行榜    

查看: 2700  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

坦荡荡2014

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何提高毕赤酵母的表达量 已有2人参与

大家好,我这里有一个问题想请这里的前辈们帮忙解决一下,我们实验室已经将外源蛋白转入毕赤酵母中,外源蛋白的A+T区已经进行了同义密码子的替换,并去除了原有的信号肽,并对密码子和发酵条件进行了优化,一直处于摇瓶表达状态,可是表达量一直很低,该怎么办?上灌会有明显的提高吗,还是要换一种载体呢?我们原来用的载体是pPIC9K~启动子是pAOX1,麻烦有经验的前辈们指教一下~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

1·宿主是啥,GS115? SMD1168?
2.诱导条件如何,初始菌体的od值多少?甲醇的量?诱导天数?如何补加的甲醇?多少温度?多少转速?发酵液气味有无明显变化?
3.酵母什么表型?mut+?muts?
4.蛋白表达量很低是啥程度,page能检测出来吗?检测过胞内有目的蛋白积累了没?
5·拷贝数有多少?抗生素筛到多大的浓度?

[ 发自小木虫客户端 ]

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

大家相互帮助哈
8楼2015-04-21 01:57:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

新版西游记

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-24 09:17:53
坦荡荡2014: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-03-24 12:57:30
做高拷贝筛选。9k是高拷贝载体,用g418梯度筛选,一般拷贝数高表达量高。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
勇往直前
2楼2015-03-23 20:55:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

坦荡荡2014

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 新版西游记 at 2015-03-23 20:55:01
做高拷贝筛选。9k是高拷贝载体,用g418梯度筛选,一般拷贝数高表达量高。

前期,师姐已经试过把拷贝数提高,可是表达量还是不理想~
3楼2015-03-24 08:32:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

坦荡荡2014

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 新版西游记 at 2015-03-23 20:55:01
做高拷贝筛选。9k是高拷贝载体,用g418梯度筛选,一般拷贝数高表达量高。

谢谢你谢谢你的回复,请问还有什么方法可以解决吗?您也是做酵母这块的吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-03-24 08:42:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +8 majunge000 2026-08-10 9/450 2026-08-12 22:17 by 虫友是什么虫
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +10 Tide man 2026-08-11 10/500 2026-08-12 20:59 by 陈晨晨陈啊
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 长年满屏的广告,版主太不责任了。基金也等的急 +4 gltch 2026-08-12 4/200 2026-08-12 16:08 by eulota
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
请填处理意见