24小时热门版块排行榜    

查看: 2725  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

坦荡荡2014

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何提高毕赤酵母的表达量 已有2人参与

大家好,我这里有一个问题想请这里的前辈们帮忙解决一下,我们实验室已经将外源蛋白转入毕赤酵母中,外源蛋白的A+T区已经进行了同义密码子的替换,并去除了原有的信号肽,并对密码子和发酵条件进行了优化,一直处于摇瓶表达状态,可是表达量一直很低,该怎么办?上灌会有明显的提高吗,还是要换一种载体呢?我们原来用的载体是pPIC9K~启动子是pAOX1,麻烦有经验的前辈们指教一下~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

1·宿主是啥,GS115? SMD1168?
2.诱导条件如何,初始菌体的od值多少?甲醇的量?诱导天数?如何补加的甲醇?多少温度?多少转速?发酵液气味有无明显变化?
3.酵母什么表型?mut+?muts?
4.蛋白表达量很低是啥程度,page能检测出来吗?检测过胞内有目的蛋白积累了没?
5·拷贝数有多少?抗生素筛到多大的浓度?

[ 发自小木虫客户端 ]

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

大家相互帮助哈
8楼2015-04-21 01:57:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

新版西游记

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-24 09:17:53
坦荡荡2014: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-03-24 12:57:30
做高拷贝筛选。9k是高拷贝载体,用g418梯度筛选,一般拷贝数高表达量高。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
勇往直前
2楼2015-03-23 20:55:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

坦荡荡2014

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 新版西游记 at 2015-03-23 20:55:01
做高拷贝筛选。9k是高拷贝载体,用g418梯度筛选,一般拷贝数高表达量高。

前期,师姐已经试过把拷贝数提高,可是表达量还是不理想~
3楼2015-03-24 08:32:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

坦荡荡2014

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 新版西游记 at 2015-03-23 20:55:01
做高拷贝筛选。9k是高拷贝载体,用g418梯度筛选,一般拷贝数高表达量高。

谢谢你谢谢你的回复,请问还有什么方法可以解决吗?您也是做酵母这块的吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-03-24 08:42:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +37 医学老男孩 2026-08-13 86/4300 2026-08-18 00:18 by longsantaizi
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见