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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 毕赤酵母甲醇诱导问题
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douxx

新虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母甲醇诱导问题已有7人参与

重组毕赤酵母甲醇到第3天，加完甲醇之后，放入摇床，但是忘了开旋转，相当于静置了18个小时，酵母会挂掉么？

担心中……

有遇到过相同情况的么？对后续试验有影响么？你们是怎么处理的？接着做还是重头再来？
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1楼2014-09-17 11:02:17
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云忠听雨

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
影响会有的，我是用15L小罐做流加发酵，一次性加入浓度太大，影响多大就看你加入的量和你的菌耐受极限了。
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2楼2014-09-17 13:03:21
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douxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 云忠听雨 at 2014-09-17 13:03:21
影响会有的，我是用15L小罐做流加发酵，一次性加入浓度太大，影响多大就看你加入的量和你的菌耐受极限了。

我用的是摇瓶培养，1L瓶子装200mL
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3楼2014-09-17 14:43:47
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douxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 云忠听雨 at 2014-09-17 13:03:21
影响会有的，我是用15L小罐做流加发酵，一次性加入浓度太大，影响多大就看你加入的量和你的菌耐受极限了。

不知道静置一天之后酵母会不会死掉，是要果断重头开始再做一遍还是接着做下去？
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4楼2014-09-17 14:56:24
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huantianxi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没问题，酵母依然在生长，只是生长的慢点。
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5楼2014-09-17 15:13:24
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douxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by huantianxi at 2014-09-17 15:13:24
没问题，酵母依然在生长，只是生长的慢点。

之前做的是大肠，也发生过一次忘开摇床，第二天师兄让重新做了。
这次遇见这种情况就很担心。
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6楼2014-09-17 15:38:50
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douxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by huantianxi at 2014-09-17 15:13:24
没问题，酵母依然在生长，只是生长的慢点。

今天还要再加甲醇进行诱导么？还是甲醇用量减半？

原来每隔24h加入1%的甲醇
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7楼2014-09-17 15:44:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
douxx: 金币+1 2014-09-18 11:07:06
如果你诱导过久，表达的蛋白质会不会降解？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2014-09-17 21:53:36
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
douxx: 金币+1 2014-09-18 11:06:57
建议重做。毕赤酵母的甲醇诱导在第3天正是产酶关键时期，突然静置菌不会死亡，但表达量会大打折扣，所以还是重做吧。当然重做前可以先做个SDS-PAGE看看是否有产物。
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9楼2014-09-17 22:24:32
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云忠听雨

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by douxx at 2014-09-17 14:56:24
不知道静置一天之后酵母会不会死掉，是要果断重头开始再做一遍还是接着做下去？...

应该不需要吧，隔段时间取样显微镜观察就知道了。
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10楼2014-09-18 08:30:35
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