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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 毕赤酵母甲醇诱导问题
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douxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-09-17 21:53:36
如果你诱导过久，表达的蛋白质会不会降解？

表达的是膜蛋白，不清楚会不会降解
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11楼2014-09-18 11:07:55
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hq0250

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
挂掉的可能性较大，甲醇诱导初期对DO要求较高，局部甲醇浓度高会导致菌体甲醇中毒。
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12楼2014-09-18 11:42:53
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
11楼: Originally posted by douxx at 2014-09-18 11:07:55
表达的是膜蛋白，不清楚会不会降解...

我只说我的实验，我在做一个胞外蛋白质的时候就发现了表达84小时就被局部降解了，你的实验我不清楚。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
13楼2014-09-18 14:18:13
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douxx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-09-17 21:53:36
如果你诱导过久，表达的蛋白质会不会降解？

毕赤酵母诱导最多诱导多久？10天左右行么？怎么选择最佳诱导时间？
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14楼2014-09-18 14:36:04
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
14楼: Originally posted by douxx at 2014-09-18 14:36:04
毕赤酵母诱导最多诱导多久？10天左右行么？怎么选择最佳诱导时间？...

我最后只诱导2天
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
15楼2014-09-18 17:03:05
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坦荡荡2014

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 云忠听雨 at 2014-09-17 13:03:21
影响会有的，我是用15L小罐做流加发酵，一次性加入浓度太大，影响多大就看你加入的量和你的菌耐受极限了。

你好，我也在用毕赤酵母表达外源蛋白，现处摇瓶阶段，可是表达量很低，师兄师姐们建议我上灌试试，上灌后外源蛋白表达量会有明显提高吗？求指点迷津~
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16楼2015-03-24 09:21:22
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云忠听雨

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 坦荡荡2014 at 2015-03-24 09:21:22
你好，我也在用毕赤酵母表达外源蛋白，现处摇瓶阶段，可是表达量很低，师兄师姐们建议我上灌试试，上灌后外源蛋白表达量会有明显提高吗？求指点迷津~...

总的说来会有一个提升，就看你的罐自动化程度了，我们的200L罐做的就没15L的好
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17楼2015-03-24 13:06:48
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坦荡荡2014

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 云忠听雨 at 2015-03-24 13:06:48
总的说来会有一个提升，就看你的罐自动化程度了，我们的200L罐做的就没15L的好...

请问一下，那一般会有多少提升呢～一般能提升多少倍呢？

[ 发自小木虫客户端 ]
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18楼2015-03-24 14:03:51
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minmin866992

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

看你是什么用处，仅仅看是否有表达产物的话，可以直接往下做，酵母不会全死的，活力下降而已；要是研究发酵进程，那必须重做了。
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19楼2015-03-25 16:10:45
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uranuser

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
18楼: Originally posted by 坦荡荡2014 at 2015-03-24 14:03:51
请问一下，那一般会有多少提升呢～一般能提升多少倍呢？
...

文献上说一般可以提高5-10倍，具体数据因品种不同而不同。我们目前在做的一个项目，提高5倍确实是可以的
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20楼2015-03-30 11:15:23
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