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毕赤酵母ppic9k表达原理问题 已有2人参与
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问题1：His4有什么用，是用来做酵母的筛选还是？ 问题2: amp和kan各有什么用。 问题3：是否可以用单酶切MCS来做线性化。 |
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问题1：His4有什么用，是用来做酵母的筛选还是？ 毕赤酵母菌株GS115及KM71都是在组氨酸脱氢酶位点（HIS4）有突变，因而不能合成组氨酸，而所有的有表达的质粒都有HIS4基因，可以与宿主进行互补，通过不含组氨酸的平板培养基来筛选转化子。 问题2: amp和kan各有什么用。 kan基因序列，在当这个质粒是转化入大肠杆菌中时，它是具有kan抗性，而当它被转化入毕赤酵母中时，它不是形成的kan抗性，而是形成的遗传酶素抗性，即我们常说的(G418)，可以对其进行多拷贝子插入子的筛选。amp的抗性基因也是在将质粒转化入大肠的时候使用的。 问题3：是否可以用单酶切MCS来做线性化。 这个我个人觉得应该是不是可以的，因为MCS本来就是多克隆位点，构建这个质粒就是在此处插入目的基因，便于产生多克隆的，如果在此处线性化，我怀疑会影响线性化后的DNA与毕赤酵母DNA的结合，导致转化失败。你在在单克隆位点线性化载体啊，这样插入毕赤酵母的基因组中，产生mut+或者muts重组子不是更好么。 |
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