| 查看: 3237 | 回复: 7 | |||
aabbwestone银虫 (初入文坛)
|
[求助]
毕赤酵母ppic9k表达原理问题已有2人参与
|
|
问题1：His4有什么用，是用来做酵母的筛选还是？ 问题2: amp和kan各有什么用。 问题3：是否可以用单酶切MCS来做线性化。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 |
» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有226人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
酵母基因组提取
已经有13人回复- 毕赤酵母电击转化ppic9k线性化
已经有10人回复
- 电击转化的问题
已经有11人回复
- 请问将目的基因转化到细胞中,但是目的基因再整合到染色体上是什么原理?
已经有4人回复
- 毕赤酵母发酵诱导表达
已经有16人回复
- 有关毕赤酵母表达
已经有3人回复
- 毕赤酵母表达时的杂蛋白问题
已经有16人回复
- 请问表达载体pPIC9K里有几个XhoI的酶切位点？
已经有8人回复
- 电击转化各种不长，求助啊~~~
已经有6人回复
- 毕赤酵母用于电转化制备感受态细胞步骤
已经有13人回复
- 酵母表达，用BglⅡ线性化9k时目的基因是如何整合到基因组上的
已经有6人回复
- 蛋白表达分子量偏大
已经有25人回复
- 毕赤酵母表达问题求教
已经有19人回复
- 怎样鉴定毕赤（GS115）重组菌是胞内还是胞外表达
已经有5人回复
- 有关毕赤酵母的平板筛选
已经有11人回复
- 毕赤酵母表达过程中线性化DNA去磷酸化的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】用毕赤酵母表达载体pPIC9K表达蛋白时分子量的估计？
已经有4人回复
- 【求助/交流】请教pPIC9K问题
已经有6人回复
Dearstar
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1486.2
- 散金: 5
- 红花: 1
- 帖子: 145
- 在线: 25.2小时
- 虫号: 2017400
- 注册: 2012-09-20
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aabbwestone: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-09-02 17:14:14
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:38:14
感谢参与，应助指数 +1
aabbwestone: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-09-02 17:14:14
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:38:14
|
问题1：His4有什么用，是用来做酵母的筛选还是？ 毕赤酵母菌株GS115及KM71都是在组氨酸脱氢酶位点（HIS4）有突变，因而不能合成组氨酸，而所有的有表达的质粒都有HIS4基因，可以与宿主进行互补，通过不含组氨酸的平板培养基来筛选转化子。 问题2: amp和kan各有什么用。 kan基因序列，在当这个质粒是转化入大肠杆菌中时，它是具有kan抗性，而当它被转化入毕赤酵母中时，它不是形成的kan抗性，而是形成的遗传酶素抗性，即我们常说的(G418)，可以对其进行多拷贝子插入子的筛选。amp的抗性基因也是在将质粒转化入大肠的时候使用的。 问题3：是否可以用单酶切MCS来做线性化。 这个我个人觉得应该是不是可以的，因为MCS本来就是多克隆位点，构建这个质粒就是在此处插入目的基因，便于产生多克隆的，如果在此处线性化，我怀疑会影响线性化后的DNA与毕赤酵母DNA的结合，导致转化失败。你在在单克隆位点线性化载体啊，这样插入毕赤酵母的基因组中，产生mut+或者muts重组子不是更好么。 |
aabbwestone2楼2014-09-02 09:27:39
3楼2014-09-02 15:32:20
aabbwestone
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 176.3
- 帖子: 31
- 在线: 43.6小时
- 虫号: 2198323
- 注册: 2012-12-21
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2014-09-02 17:18:08
aabbwestone
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 176.3
- 帖子: 31
- 在线: 43.6小时
- 虫号: 2198323
- 注册: 2012-12-21
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2014-09-02 17:21:36
6楼2014-09-03 07:04:26
Dearstar
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1486.2
- 散金: 5
- 红花: 1
- 帖子: 145
- 在线: 25.2小时
- 虫号: 2017400
- 注册: 2012-09-20
- 专业: 蛋白质组学
7楼2014-09-03 13:09:54
aabbwestone
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 176.3
- 帖子: 31
- 在线: 43.6小时
- 虫号: 2198323
- 注册: 2012-12-21
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2014-09-10 16:09:37