应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母ppic9k表达原理问题
51/1返回列表
查看: 3641  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

aabbwestone

银虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母ppic9k表达原理问题 已有2人参与

问题1：His4有什么用，是用来做酵母的筛选还是？
问题2: amp和kan各有什么用。
问题3：是否可以用单酶切MCS来做线性化。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
rightbackinthewater
1楼 2014-09-01 10:58:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aabbwestone

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sierjing at 2014-09-02 15:32:20
你好：
      我也想做毕赤酵母表达的，请问是自己实验室还是在公司购买的

ppic9k应该是购买invitrogen公司的
赞一下 回复此楼
rightbackinthewater
5楼2014-09-02 17:21:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

Dearstar

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aabbwestone: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-09-02 17:14:14
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-09-03 18:38:14
问题1：His4有什么用，是用来做酵母的筛选还是？
毕赤酵母菌株GS115及KM71都是在组氨酸脱氢酶位点（HIS4）有突变，因而不能合成组氨酸，而所有的有表达的质粒都有HIS4基因，可以与宿主进行互补，通过不含组氨酸的平板培养基来筛选转化子。
问题2: amp和kan各有什么用。
kan基因序列，在当这个质粒是转化入大肠杆菌中时，它是具有kan抗性，而当它被转化入毕赤酵母中时，它不是形成的kan抗性，而是形成的遗传酶素抗性，即我们常说的(G418)，可以对其进行多拷贝子插入子的筛选。amp的抗性基因也是在将质粒转化入大肠的时候使用的。
问题3：是否可以用单酶切MCS来做线性化。
这个我个人觉得应该是不是可以的，因为MCS本来就是多克隆位点，构建这个质粒就是在此处插入目的基因，便于产生多克隆的，如果在此处线性化，我怀疑会影响线性化后的DNA与毕赤酵母DNA的结合，导致转化失败。你在在单克隆位点线性化载体啊，这样插入毕赤酵母的基因组中，产生mut+或者muts重组子不是更好么。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

aabbwestone
2楼2014-09-02 09:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sierjing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好：
      我也想做毕赤酵母表达的，请问是自己实验室还是在公司购买的
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-02 15:32:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aabbwestone

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Dearstar at 2014-09-02 09:27:39
问题1：His4有什么用，是用来做酵母的筛选还是？
毕赤酵母菌株GS115及KM71都是在组氨酸脱氢酶位点（HIS4）有突变，因而不能合成组氨酸，而所有的有表达的质粒都有HIS4基因，可以与宿主进行互补，通过不含组氨酸的平 ...

非常感谢，还有两个问题，表达的蛋白怎么纯化；用5AOX1和HIS做线性化是否都可以
赞一下 回复此楼
rightbackinthewater
4楼2014-09-02 17:18:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:13 by jCd0dEvKHShX
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 14:03 by jCd0dEvKHShX
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:51 by jCd0dEvKHShX
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 11:49 by jCd0dEvKHShX
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:29 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 11:18 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +3 349506619 2026-08-28 3/150 2026-08-29 10:49 by 木风9012
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-29 10:18 by winsaint
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭