| 查看: 5153 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求助TCA沉淀浓度蛋白的问题 已有2人参与
|
||
|
我做的是毕赤酵母表达外源蛋白，由于蛋白的表达量较少，需要浓缩后，电泳分析。 我用的TCA方法是： 1mL 样品中加入180μL ~ 200μL 预冷的TCA，充分震荡，于4℃保存过夜。第二天离心去掉上清，加入200μL预冷的丙酮，洗涤两次。沉淀用缓冲液重溶，电泳。 我的问题是：样品是通过离子交换柱浓缩得到的、具有活性，但是加入TCA后没有沉淀出现，所以离心去上清的时候我保留几μL的液体，再加入丙酮，就会有白色沉淀出现。之后进行电泳，能看到目的蛋白。是不是TCA不能沉淀出蛋白，而丙酮将蛋白沉淀出来，也有人说丙酮沉淀出的是盐。求助我的方法是不是有问题，需要怎么改进？ |
回复此楼» 猜你喜欢
291求调剂
已经有7人回复
-
300求调剂
已经有8人回复
-
求调剂推荐
已经有7人回复
-
289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校)
已经有4人回复
-
0854求调剂
已经有13人回复
-
初试324 中药学 一志愿天中医 求调剂
已经有3人回复
-
药学求调剂
已经有14人回复
-
327求调剂
已经有27人回复
-
急需调剂
已经有5人回复
-
271求调剂
已经有33人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助如何利用HPLC 测定ATP 含量的问题
已经有4人回复
- 沉淀蛋白的方法？
已经有11人回复
- 沉淀后的蛋白质怎样溶解？
已经有3人回复
- 原核表达只能在沉淀中检测出目标蛋白怎么办
已经有9人回复
- 求解：纯化蛋白跑SDS-PAGE，没有条带
已经有13人回复
- 关于TCA法沉淀蛋白质。。是要怎么操作的呢？
已经有11人回复
- TCA法沉淀上清液中蛋白！！！
已经有3人回复
- 关于分子吸光系数和吸光值求浓度的问题，急急急
已经有20人回复
- 细胞破壁去除蛋白的方法
已经有13人回复
- 蛋白放置一段时间后出现沉淀的问题
已经有11人回复
- 有人用三氟乙酸沉淀过蛋白吗？浓度要多大？
已经有5人回复
- 蛋白样品解冻后沉淀
已经有7人回复
- 碱溶提取的蛋白质沉淀不下来呢
已经有9人回复
- 求助：蛋白变性后还能测浓度吗？
已经有5人回复
- 为什么柠檬酸会使藻蓝蛋白沉淀
已经有9人回复
- 用乙醇沉淀多糖或蛋白时加入盐的浓度
已经有3人回复
- 双向电泳条纹等问题求助
已经有15人回复
- 蛋白沉淀的奇异事件
已经有8人回复
- 乙腈沉淀蛋白的一般用量
已经有6人回复
- 求助硫酸铵沉淀蛋白质的问题
已经有12人回复
- TCA/丙酮沉淀，蛋白为什么不溶呢？？
已经有14人回复
- 双向，TCA丙酮沉淀提取的蛋白，裂解液是不是水化液一样啊 ？
已经有6人回复
- 【求助】蛋白酶解液沉淀无法分离的问题
已经有23人回复
- 【求助】20%三氯乙酸沉淀蛋白需要多久？
已经有15人回复
- 【求助/交流】TCA法沉淀蛋白量少怎么办
已经有3人回复
- 【求助】生物样品的前处理-沉淀蛋白质
已经有19人回复
7楼2015-03-10 20:19:51
2楼2015-03-10 13:33:26
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
id90: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-03-12 09:26:06
感谢参与，应助指数 +1
id90: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-03-12 09:26:06
|
首先了解一下TCA沉淀的原理，TCA是酸，可以使蛋白变性，从而沉淀下来，另外TCA可以与蛋白形成不溶性的盐。总之TCA沉淀一般是不可逆的，也就是TCA是用来除杂蛋白的，而且效果是很明显的，你的样品加入TCA后没有沉淀是你的TCA浓度不够，你加大TCA浓度肯定有沉淀，可以做一个TCA梯度试试。 但是，个人建议，像我上述所说，TCA沉淀一般不可逆，所以建议你TAC沉淀过程尽量使你的目的蛋白保留在上清液中，然后用丙酮再纯化一次。 丙酮属于有机溶剂沉淀蛋白，是剥离蛋白的水化膜，从而使蛋白分子碰撞沉淀，稀释后可以复性。你所说的丙酮沉淀生成盐是错误的，酸还有重金属沉淀蛋白才会生成盐。 |
3楼2015-03-10 14:25:42
4楼2015-03-10 16:36:06
